梔子豉湯改善Ⅱ型糖尿病大鼠胰島素抵抗的機制研究.pdf

1、目的:梔子豉湯為《傷寒論》治療“虛煩”而又“心中懊惱”的名方,現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)梔子、淡豆豉均有降低血糖,改善糖耐量的作用,關(guān)于梔子豉湯的相關(guān)研究尚未見報道。本研究采用胰島素抵抗大鼠模型,通過觀察胰島素抵抗大鼠肝組織胰島素受體表達變化及影響胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的相關(guān)因素的變化。在整體與分子水平探討梔子豉湯改善2型糖尿病胰島素抵抗的部分分子機制,并通過觀察自發(fā)性高血壓大鼠血壓及血管緊張素Ⅱ1型受體表達的變化,初步探討梔子豉湯對血管緊張素Ⅱ影響胰

2、島素轉(zhuǎn)導(dǎo)通路而致胰島素抵抗的作用。為古方新用提供了理論及實驗依據(jù)。
　　 方法:
　　 1梔子豉湯對2型糖尿病大鼠胰島素抵抗的影響
　　 采用小劑量鏈脲佐菌素加高脂飼料方法建立Wistar大鼠2型糖尿病經(jīng)典模型。依血糖值隨機分為五組:模型對照組,梔子豉湯低劑量組(4g生藥/kg),梔子豉湯中劑量組(8g生藥/kg),梔子豉湯高劑量組(16g生藥/kg)及陽性藥羅格列酮組(1.8mg/kg.d),另取10只Wist

3、ar大鼠做為空白對照組,給予常規(guī)飼料喂養(yǎng)。空白對照組與模型對照組灌服蒸餾水。給藥(水)容量為10mL/kg,連續(xù)給藥8周,末次給藥后禁食十二小時,取血、胰腺、肝臟進行相關(guān)指標(biāo)檢測。
　　 1.1血液生化檢測:斷頭取血,低溫離心,分離血清,檢測空腹血糖(FPG)、糖化血紅蛋白(HbAlc)、血清胰島素(FINS)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)等,由公式ISI=ln[1/(FPG×FIN

4、S)]計算胰島素敏感指數(shù)(ISI)。
　　 1.2胰腺組織形態(tài)學(xué)檢測:取胰腺組織10％甲醛固定,石蠟切片,HE染色制片觀察胰腺組織形態(tài)的變化。
　　 1.3肝細胞膜胰島素受體(InsR)mRNA定量分析:迅速取出肝臟,RT-PCR法測定肝組織InsR mRNA的表達。
　　 2梔子豉湯對自發(fā)性高血壓大鼠血管緊張素Ⅱ1型受體表達的影響
　　 選取SHR大鼠50只,依據(jù)血壓隨機分為五組,模型對照組、陽性藥卡托

5、普利組(2mg/kg)、梔子豉湯低劑量組(4g生藥/kg)、梔子豉湯中劑量組(8g生藥/kg)、梔子豉湯高劑量組(16g生藥/kg),給藥容量10mL/kg,連續(xù)給藥28天,分別于第7天、14天、21天、28天測量每只大鼠的血壓值。
　　 2.1梔子豉湯對自發(fā)性高血壓大鼠血壓的影響
　　 采用BESN-Ⅱ多通道動物無創(chuàng)測壓系統(tǒng)測定各組動物的收縮壓值。
　　 2.2主動脈AT1R mRNA表達水平檢測
　　

6、 Trizol法提取主動脈組織總RNA,RT-PCR法測定主動脈AT1R mRNA的表達。
　　 2.3心肌組織AT1R mRNA表達水平檢測
　　 Trizol法提取心肌總RNA,RT-PCR法測定心肌AT1R mRNA的表達。
　　 結(jié)果:
　　 1梔子豉湯對2型糖尿病大鼠胰島素抵抗的影響
　　 1.1對血液生化指標(biāo)的影響
　　 1.1.1對FPG、HbAlc水平的影響:模型對照組FP

7、G及HbAlc水平較空白對照組顯著升高(P＜0.01),各給藥組較模型對照組有不同程度的降低(P＜0.01或P＜0.05);
　　 1.1.2對FINS水平、ISI的影響:模型對照組FINS較空白對照組顯著升高(P＜0.01);梔子豉湯組低、中、高劑量組及陽性藥組FINS較模型對照組顯著降低(P＜0.01)。模型對照組ISI較空白對照組顯著降低(P＜0.01);各給藥組較模型對照組ISI明顯升高(P＜0.01);
　　

8、1.1.3對TNF-α水平的影響:模型對照組TNF-α水平較空白對照組顯著升高(P＜0.01);梔子豉湯組低、中、高劑量組及陽性藥組TNF-α水平較模型對照組明顯降低(P＜0.01);
　　 1.1.4對SOD活性、MDA水平的影響:模型對照組SOD水平較空白對照組顯著降低(P＜0.01),梔子豉湯中、高劑量組及陽性藥組SOD較模型對照組有明顯的升高(P＜0.01或P＜0.05),梔子豉湯低劑量組較模型對照組有升高的趨勢,但無顯

9、著差異(P＞0.05)。模型對照組MDA含量較空白對照組明顯升高(P＜0.01),梔子豉湯各劑量組及陽性藥組MDA含量較模型對照組顯著降低(P＜0.01或P＜0.05)。
　　 1.2胰腺組織形態(tài)學(xué)檢查
　　 模型對照組較空白對照組胰島明顯萎縮,部分胰島細胞胞漿內(nèi)有空泡變性,細胞核固縮,視野中胰島數(shù)量顯著下降,體積縮小。梔子豉湯中、高劑量組及陽性藥組較模型組胰島細胞數(shù)量有明顯增多,空泡明顯減少,并且視野中胰島組織完整,島

10、形飽滿,境界清晰。
　　 1.3對肝組織InsR mRNA表達水平的影響
　　 模型對照組InsR mRNA表達較空白對照組明顯降低(P＜0.01);與模型對照組相比較,梔子豉湯各劑量組及羅格列酮組InsR mRNA表達明顯升高(P＜0.01或P＜0.05)。
　　 2梔子豉湯對自發(fā)性高血壓大鼠AT1 mRNA表達的影響
　　 2.1對自發(fā)性高血壓大鼠血壓的影響
　　 梔子豉湯低劑量組血壓較模型對

11、照組有降低趨勢,但無顯著差異(P＞0.05),梔子豉湯中、高劑量組及卡托普利組血壓較模型對照組顯著降低(P＜0.01或P＜0.05)。
　　 2.2對自發(fā)性高血壓大鼠主動脈AT1R mRNA表達的影響
　　 與模型對照組比較,梔子豉湯中劑量組、高劑量組及卡托普利組AT1RmRNA表達明顯降低(P＜0.01),梔子豉湯低劑量組AT1R表達水平下降,但無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 2.3對自發(fā)性高血壓大鼠心肌

12、AT1R mRNA表達的影響
　　 與模型對照組比較,梔子豉湯各劑量組及卡托普利組AT1R mRNA表達不同程度的下降(P＜0.01或P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1梔子豉湯可降低FPG、HbAlc、FINS水平,改善2型糖尿病大鼠胰腺組織的損傷,具有提高胰島素敏感性,改善胰島素抵抗的作用。
　　 2梔子豉湯改善胰島素抵抗作用可能與上調(diào)肝臟胰島素受體InsR mRNA的表達有關(guān)。
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