果寡糖對兩種魴屬魚生長、免疫和抗應激的研究.pdf

1、在目前的水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中，病毒、病菌會對魚類造成威脅、環(huán)境因子的急劇變化等也會對其造成不良應激。尤其是夏季，是魚病的高發(fā)期，應激現(xiàn)象也尤為嚴重，疾病大規(guī)模的爆發(fā)，造成了死亡率上升和生長緩慢等現(xiàn)象，最終造成了巨大的經(jīng)濟損失。過去主要是通過使用抗生素來對抗疾病，但是抗生素的負面影響也有不少報道，因此，如何通過綠色環(huán)保的途徑提高魚體免疫力成為當前研究的熱點。果寡糖是一種不能被機體完全消化吸收利用而通過調(diào)節(jié)腸道微生物促進機體健康的一種新型飼料添加

2、劑，作為飼料添加劑有著廣闊的應用前景。
　　團頭魴（Megalobrama amblycephala）和三角魴（Megalobrama terminalis）都是魴屬魚類，屬于鯉科，具有生長速度快，易繁殖，抗病力強，肉質(zhì)鮮美等特點成為淡水養(yǎng)殖的珍品。近年來，由嗜水氣單胞菌等病菌的感染、應激引起的暴發(fā)性出血病在團頭魴養(yǎng)殖中也時有發(fā)生。鑒于此，本研究通過研究果寡糖對魴屬魚類健康機理調(diào)控機制的影響，開發(fā)新型飼料添加劑，增強魴屬魚類的免疫

3、力，提高其抗病力和抗應激能力，為解決水產(chǎn)養(yǎng)殖中容易出現(xiàn)的高發(fā)病率和應激提供依據(jù)。本研究試驗內(nèi)容主要由6部分組成:
　　1飼料中不同添加水平的果寡糖在不同投喂模式下對團頭魴生長性能、免疫指標、抗氧化和抗病力的影響
　　本試驗的目的主要是探討飼料中的果寡糖在不同添加水平和不同投喂模式下對團頭魴生長性能、免疫指標、抗氧化和抗病力的影響，3個果寡糖水平(0、0.4％、0.8％)和2種投喂模式（連續(xù)投喂、間隔5天投喂）采用3×2因素設

4、計，經(jīng)過8周的養(yǎng)殖試驗后，用嗜水氣單胞菌在1×105cfu/ml濃度下對采樣剩余的魚進行攻毒試驗，并統(tǒng)計其在96h內(nèi)的死亡率。試驗結(jié)果表明，連續(xù)投喂0.4％組和間隔投喂0.8％果寡糖組的生長性能較好，血清中溶菌酶、ACP、MPO的活性以及補體C3、總蛋白和免疫球蛋白的含量都是在間隔投喂0.8％果寡糖組出現(xiàn)最大值，顯著好于（P＜0.05）對照組或連續(xù)投喂0.8％果寡糖組，但是和連續(xù)投喂0.4％果寡糖組并無顯著差異(P＞0.05)，抗菌肽L

5、EAP-1和LEAP-2都出現(xiàn)相同的趨勢，死亡率在間隔投喂0.8％果寡糖組出現(xiàn)最小值，顯著低于對照組，此試驗結(jié)果表明，果寡糖在適宜的添加濃度和投喂模式下能夠提高團頭魴生長性能、免疫力、抗氧化能力和抗病力，連續(xù)投喂0.4％果寡糖組和間隔投喂0.8％果寡糖組產(chǎn)的效果較好。
　　2高溫應激下果寡糖對團頭魴免疫、抗氧化和熱休克蛋白基因表達的影響
　　本試驗的目的是研究果寡糖在高溫應激下對團頭魴免疫、抗氧化和熱休克蛋白（HSP70和H

6、SP90）基因表達的影響，360尾初重為13.8g的團頭魴隨機被分為3組，每組有4個重復，每缸30尾魚，分別投喂果寡糖濃度為0、0.4％、0.8％的三組飼料，經(jīng)過8周的養(yǎng)殖試驗后，每缸挑選20尾魚，用34℃的高溫對其進行急性熱應激試驗，并分別在應激前(0h)和應激后的3h、6h、12h、24h、48h采樣。結(jié)果表明血液皮質(zhì)醇和血糖在應激后的3h和6h處0.4％果寡糖組明顯低于對照組(P＜0.05），乳酸含量在這一組的3h處也顯著小于對照

7、組(P＜0.05），血液溶菌酶、酸性磷酸酶和補體ACH50的活性以及總蛋白、免疫球蛋白的含量在應激后都呈現(xiàn)先升高或降低的趨勢，并在6h處出現(xiàn)最大值，另外添加0.4％果寡糖組的免疫指標的活性在3h或6h處大部分都顯著高于對照組(P＜0.05);肝臟SOD和CAT活性在應激前和應激后都是0.4％果寡糖組顯著高于對照組(P＜0.05），而MDA含量呈相反的趨勢;添加果寡糖增強HSP70和HSP90基因的表達量，并在3h、6h或12h顯著高于對

8、照組(P＜0.05）。本試驗得出飼料中添加適宜濃度的果寡糖能夠提高團頭魴的免疫指標活性、抗氧化能力和熱休克蛋白的表達，從而提高了團頭魴的抗高溫應激的能力。
　　3氨氮應激下果寡糖對團頭魴免疫、抗氧化和熱休克蛋白基因表達的影響
　　本試驗的目的是研究在氨氮應激條件下果寡糖對團頭魴免疫指標、抗氧化和熱休克蛋白（HSP70和HSP90）基因表達的影響，360尾初重為13.8g的團頭魴隨機分為3組，每組4個重復，每缸30尾魚，對照組

9、投喂基礎日糧，試驗組分別投喂果寡糖添加濃度為0.4％和0.8％的試驗日糧，養(yǎng)殖試驗結(jié)束后，用10mg/L的NH4Cl對采樣剩余的24尾魚進行氨氮應激試驗。試驗結(jié)果表明，應激后的3h或6h分別發(fā)現(xiàn)，血清皮質(zhì)醇和血糖在投喂0.4％果寡糖組顯著低于對照組(P＜0.05)，血清溶菌酶、補體ACH50的活性以及NO的含量都呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，并且分別在6h，6h，和3h的0.4％果寡糖組顯著高于對照組(P＜0.05），在應激前后的0.4％組肝

10、臟的超氧化物歧化酶(SOD)和過氧化氫酶(CAT)的活性都顯著高于對照組(P＜0.05），但是丙二醛含量的變化呈相反的趨勢。應激后，試驗驗組的HSP70和HSP90的相對表達量分別在6h和12h處顯著高于對照組（P＜0.05），應激后12h后發(fā)現(xiàn)試驗組的累計死亡率也顯著低于對照組(P＜0.05），本試驗結(jié)果表明飼料中添加0.4％的果寡糖能夠提高團頭魴的免疫力指標活性、抗氧化能力和熱休克基因的表達，從而提高了團頭魴抗氨氮應激的能力。

11、>　　4果寡糖和芽孢桿菌交互對三角魴生長性能、體組成、腸道消化酶和腸道微絨毛發(fā)育的影響
　　本研究的目的是為了研究果寡糖和地衣芽孢桿菌對三角魴生長性能、體組成、腸道消化酶和腸道微絨毛的發(fā)育的影響，采用3×3交互的方法，試驗魚隨機分成9組，其中果寡糖分別為0、0.3％、0.6％3個水平，芽孢桿菌的添加水平分別為0、1×107CFU/g、5×107CFU/g三個水平。經(jīng)過8周的養(yǎng)殖試驗后，試驗結(jié)果得出末重和特定生長率都隨著果寡糖的添加

12、量的增加而呈現(xiàn)升高趨勢，而隨著芽孢桿菌的增加而呈先升高后降低的趨勢，另外，果寡糖和芽孢桿菌的交互作用對三角魴的末重、特定生長率和成活率都有較顯著的影響(P＜0.05)，并在果寡糖添加量為0.3％、芽孢桿菌1×107CFU/g復配組生長性能出現(xiàn)最大值，肝體比、胴體脂肪含量、脂肪酶活性和腸道微絨毛長度都隨著芽孢桿菌添加量從0到1×107的增加而增加，但這些指標受果寡糖添加水平的影響并不顯著(P＞0.05);蛋白酶和Na+，K+-ATP酶的活

13、性受果寡糖和芽孢桿菌交互作用的顯著影響(P＜0.05)，并果寡糖添加量為0.3％、芽孢桿菌1×107CFU/g復配組出現(xiàn)最高值，以上試驗結(jié)果表明飼料中添加適量的果寡糖和芽孢桿菌可以提高三角魴的生長性能、腸道消化酶和微絨毛長度，并且果寡糖和芽孢桿菌之間存在顯著的交互作用，飼料中最適的添加水平為0.3％果寡糖和1×107CFU/g的芽孢桿菌配伍。
　　5果寡糖和芽孢桿菌交互對三角魴免疫指標活性、抗氧化和抗病力的影響
　　為了研究

14、果寡糖和地衣芽孢桿菌交互對三角魴免疫、抗氧化和抗病力的研究，三個水平的果寡糖（0、0.3％和0.6％）以及三個芽孢桿菌水平(0，1×107，5×107 CFU g-1)通過3×3因素交互，共制成9組飼料，投喂三角魴8周，養(yǎng)殖試驗結(jié)束后用嗜水氣單胞菌進行攻毒試驗，并統(tǒng)計其一周內(nèi)的累計死亡率，結(jié)果表明，隨著芽孢桿菌添加水平從0到1×107 CFU/g的增加而增加，血液白細胞數(shù)、補體ACH50、總蛋白和球蛋白都呈升高的趨勢，但是果寡糖添加水平

15、對這些指標并無明顯的增加(P＞0.05)，堿性磷酸酶和酚氧化酶都受到果寡糖添加水平的顯著影響，分別在添加0.6％和0.3％組出現(xiàn)最大值，免疫球蛋白和肝臟超氧化物歧化酶都是即受到果寡糖添加水平的影響P＜0.05），又受到芽孢桿菌添加水平的顯著影響(P＜0.05)，肝臟中的CAT、GPX和血液中的SOD的活性在1×107 CFU/g組顯著高于其它組（P＜0.05），但是丙二醛的含量呈相反的趨勢，嗜水氣單胞菌攻毒后累計死亡率顯著受到果寡糖和芽

16、孢桿菌交互作用的影響(P＜0.05），并且在0.3％果寡糖和1×107 CFU/g芽孢桿菌配伍組死亡率最小，本研究結(jié)果表明果寡糖和地衣芽孢桿菌能顯著提高三角魴的免疫指標活性、抗氧化和抗病力。并建議三角魴飼料中添加0.3％果寡糖和1×107 CFU/g的地衣芽孢桿菌復配使用。
　　6團頭魴IL-6基因克隆分析和氨氮應激及攻毒對其表達量的影響
　　IL-6基因是典型的促炎因子，在免疫反應和炎癥反應起到重要作用，并能影響巨噬細胞的

17、功能，本研究主要是對IL-6基因的cDNA的全長序列進行了克隆，并對在氨氮應激以及攻毒之后，它在不同組織表達量變化的差異進行了分析，結(jié)果顯示IL-6基因一共包含了1045個堿基，開放閱讀框有696個堿基，翻譯了232個氨基酸，其中信號肽是1-24個氨基酸，通過對不同組織IL-6基因的相對表達量分析，IL-6基因在腸道、肝臟和鰓組織的表達比較高，在眼和腹脂的表達量較低，在氨氮應激之后，脾臟和腸道IL-6基因的相對表達量出現(xiàn)先上升后下降的趨