用于口腔骨組織修復(fù)藻酸鈣凝膠的制備及生物學(xué)性能研究.pdf

1、目的：
　　本課題旨在制備有助于口腔牙周骨組織再生的可載藥海藻酸鈣凝膠及其納米復(fù)合材料，檢測材料物理性能，同時檢測體內(nèi)和體外生物學(xué)性能，最后研究復(fù)合材料的抗菌能力。為后期進(jìn)行3D打印復(fù)合支架的研究和其臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
　　方法：
　　材料:海藻酸鈉粉末、氯化鈣粉末、牛血清百蛋白、高糖培養(yǎng)基、胎生血清、青鏈霉素抗菌劑、膠原酶、PBS溶液、二甲基亞砜、MTT檢測試劑盒、成品納米銀、LB營養(yǎng)培養(yǎng)基、蘇木素、伊紅、二甲苯、冰

2、凍切片機(jī)、倒置顯微鏡、Micro-CT機(jī)。
　　方法:離子交聯(lián)法制備海藻酸鈣水凝膠后進(jìn)行成分檢測;使用BCA比色法測量材料蛋白釋放量;監(jiān)測干重與濕重進(jìn)行吸水率測定;分別測量3天、7天、14天、28天及56天時預(yù)定時間點(diǎn)的干重及濕重，分析材料降解情況;進(jìn)行牙周膜細(xì)胞原代的培養(yǎng)，使用免疫組化染色進(jìn)行鑒定;MTT（四唑鹽）法檢測人牙周膜細(xì)胞(hPDLCs)的增殖及海藻酸鈣水凝膠對細(xì)胞毒性;RT-PCR檢測材料對hPDLCs炎癥相關(guān)因子表

3、達(dá)以及骨髓基質(zhì)干細(xì)胞成骨相關(guān)基因表達(dá)的影響;茜素紅染色法檢測礦化能力;通過肉湯稀釋法測量納米銀顆粒最低抑菌濃度;離子交聯(lián)法制備海藻酸鈣/納米銀復(fù)合水凝膠材料并對其成分分析;采用抑菌圈法檢測納米銀復(fù)合海藻酸鈣水凝膠對金黃色葡萄球菌的抑菌作用;HE染色觀察海藻酸鈣水凝膠對軟組織初期炎癥反應(yīng);制備下頜骨缺損模型;采用Micro-CT對海藻酸鈣水凝膠骨修復(fù)能力評價。所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)三次。統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)（x±S）進(jìn)行單

4、因素方差分析(one-way ANOVA)分析。若方差齊，則用Dunnett和Bonferronili對數(shù)據(jù)進(jìn)行兩兩比較分析;若方差不齊，則使用Dunnett's分析，p＜0.05表示具有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)果：
　　成功制備可載藥注射型海藻酸鈣水凝膠;吸水率測定顯示海藻酸鈣水凝膠顯示出良好的吸水性能;降解實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明25mg/mL濃度的海藻酸鈣水凝膠其降解時間與骨組織再生成時間更為匹配;二種濃度海藻酸鈣水凝膠均處于1級，可

5、認(rèn)為材料對于人牙周膜細(xì)胞無毒性，生物安全性能良好。海藻酸鈣水凝膠及PLA支架材料均促進(jìn)牙周膜細(xì)胞炎癥因子的表達(dá);海藻酸鈣水凝膠共培養(yǎng)后的細(xì)胞形成的礦化結(jié)節(jié)比空白組及PLA組明顯增多;海藻酸鈣水凝膠促進(jìn)成骨相關(guān)因子表達(dá);成功制備海藻酸鈣水凝膠載納米銀材料;復(fù)合了納米銀后材料具備抑菌作用;海藻酸鈣水凝膠導(dǎo)致的軟組織炎癥反應(yīng)輕，且與組織結(jié)合良好;海藻酸鈣水凝膠對骨組織缺損誘導(dǎo)再生效果較PLA材料好。
　　結(jié)論：
　　成功構(gòu)建可載藥