組織蛋白酶D在苦參堿誘導(dǎo)JM細(xì)胞Type Ⅱ Cell Death中的作用及其在濾泡型淋巴瘤和淋巴濾泡過(guò)度增生中的表達(dá)研究.pdf

1、白血病是嚴(yán)重危害人類健康與生命的疾病,發(fā)病率在中國(guó)為 3~4/10萬(wàn)人口.其中,T淋巴母細(xì)胞白血病發(fā)病急,惡性程度高,嚴(yán)重危害青少年的生命.誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡是治療白血病的新策略之一.但目前所用誘導(dǎo)劑多為重金屬制劑,毒性大,難以堅(jiān)持使用.因此尋找低毒高效的白血病細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑尤顯迫切.苦參堿是一種從中藥苦參中提取的生物堿.以往的研究發(fā)現(xiàn)苦參堿可以誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡,也可以誘導(dǎo)髓系K562細(xì)胞分化和凋亡.JM為急性T淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞株.

2、我們的初步研究發(fā)現(xiàn)苦參堿可以抑制JM細(xì)胞的DNA合成,造成G1期阻滯,從而抑制JM細(xì)胞的增殖,同時(shí),該生物堿還可誘導(dǎo)JM細(xì)胞株發(fā)生PCD.進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),當(dāng)加藥后24小時(shí),光鏡、透射電鏡下可見JM細(xì)胞漿有大量空泡.隨處理時(shí)間延長(zhǎng)至第4天,可見呈"凋亡"形態(tài)學(xué)改變的細(xì)胞:染色質(zhì)濃縮、邊集,可見"凋亡"小體結(jié)構(gòu).這種形態(tài)學(xué)改變過(guò)程與Type II Cell Death較為一致.近來(lái)有文獻(xiàn)報(bào)道,組織蛋白酶家族的一些成員,如B、D、L等在不同的

3、Type II Cell Death模型中起重要作用,但其信號(hào)傳導(dǎo)的分子機(jī)理仍不清楚.我們認(rèn)為,cathepsinD在苦參堿誘導(dǎo)JM細(xì)胞發(fā)生TypeIICell Death的信號(hào)傳遞中所起的作用是必需的.藥物處理后,cathepsinD在轉(zhuǎn)錄和表達(dá)水平上調(diào),cathepsinD前體形式蓄積.JM細(xì)胞發(fā)生Type II Cell Death,不僅與cathepsinD相關(guān),而且可能與cathepsinD在核內(nèi)的重新分布有關(guān).苦參堿誘導(dǎo)JM

4、細(xì)胞發(fā)生的Type II Cell Death,可能是通過(guò)Fas/Fas-1這一死亡途徑實(shí)現(xiàn)的,細(xì)胞內(nèi)cathepsinD表達(dá)的上調(diào)發(fā)生在激活Fas/Fas-L死亡程序之前.cathepsinD在T淋巴母細(xì)胞白血病JM細(xì)胞株的Type II Cell Death中表達(dá)上調(diào),那么其在B淋巴細(xì)胞及其起源的疾病中的表達(dá)情況如何呢?因此,我們也檢測(cè)了cathepsin D在濾泡型淋巴瘤(FL)和淋巴濾泡過(guò)度增生(FH)的生發(fā)中心的表達(dá).我們用免

5、疫組化LSAB法,檢測(cè)了10例FL,9例FH淋巴結(jié)石蠟標(biāo)本中cathepsin D的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)在10例FL標(biāo)本中,cathepsin D陽(yáng)性信號(hào)較弱,位于瘤性濾泡生發(fā)中心樹突狀細(xì)胞漿內(nèi).濾泡中心部分的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目少,而靠近邊緣部位較多.所有病例的濾泡生發(fā)中心瘤細(xì)胞cathepsin D表達(dá)陰性.在9例FH標(biāo)本中,胞漿染色陽(yáng)勝的樹突狀細(xì)胞均勻彌散地分節(jié)于生發(fā)中心,陽(yáng)性信號(hào)比FL組強(qiáng),而濾泡內(nèi)其他細(xì)胞均為陰性.有4例FL的瘤性生發(fā)中心被

6、殘存的套區(qū)細(xì)胞包繞,這些被包繞的生發(fā)中心內(nèi)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目較其他6例FL無(wú)套區(qū)細(xì)胞包繞的生發(fā)中心內(nèi)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目多.在部分無(wú)套區(qū)細(xì)胞包繞的生發(fā)中心內(nèi),cathepsin D陽(yáng)性染色細(xì)胞甚至缺如.因此,我們認(rèn)為:cathepsin D可作為一種淋巴結(jié)濾泡樹突狀細(xì)胞良好的標(biāo)志物.cathepsin D在FL瘤性濾泡和在FH濾泡中樹突狀細(xì)胞中的差異表達(dá),可作為一項(xiàng)鑒別兩種疾病的指標(biāo).在FL瘤性濾泡中cathepsin D陽(yáng)性樹突狀細(xì)胞的減少,可能與