人工栽培及野生七葉一枝花抗肝癌作用及其機(jī)制.pdf

1、目的：通過(guò)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)對(duì)陜西地區(qū)野生七葉一枝花抗肝癌作用加以驗(yàn)證；分別采用肝癌H22小鼠、人肝癌SMMC-7721裸鼠模型，探討陜西地區(qū)人工栽培及野生七葉一枝花體內(nèi)抗肝癌活性及機(jī)制的差異。為發(fā)展當(dāng)?shù)仄呷~一枝花人工栽培產(chǎn)業(yè)提供必要的科學(xué)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法:
　　①野生七葉一枝花對(duì)肝癌H22小鼠實(shí)體瘤的抑制作用：建立肝癌H22小鼠模型,實(shí)驗(yàn)分為模型組，環(huán)磷酰胺（CTX）組，野生品（YS）高、中、低（2.46、1.23、0.615

2、g/kg）組，連續(xù)給藥14d后，取瘤體稱重計(jì)算抑瘤率。實(shí)驗(yàn)重復(fù)三批。
　?、谝吧呷~一枝花對(duì)肝癌H22腹水瘤小鼠生存期的影響：建立肝癌H22腹水瘤小鼠模型，分組給藥同實(shí)驗(yàn)一，觀察并記錄生存時(shí)間。實(shí)驗(yàn)重復(fù)三批。
　?、廴斯ぴ耘嗉耙吧呷~一枝花對(duì)肝癌H22小鼠實(shí)體瘤的抑制作用及免疫功能的影響：建立肝癌H22小鼠模型，實(shí)驗(yàn)分為模型組，CTX組，人工栽培品（RG）高、中、低（2.46、1.23、0.615 g/kg）組。野生品（YS

3、）高、中、低（2.46、1.23、0.615 g/kg）組。實(shí)驗(yàn)重復(fù)三批。連續(xù)給藥14d后，摘眼球取血，ELISA法測(cè)定血清中IL-2、TNF-a、NK的活性。取瘤體、胸腺和脾臟稱重，計(jì)算抑瘤率、胸腺和脾臟指數(shù)。
　　④人工栽培及野生七葉一枝花對(duì)人肝癌SMMC-7721裸鼠移植瘤的抑制作用：建立人肝癌SMMC-7721裸鼠模型，實(shí)驗(yàn)分為模型組，CTX組，RG高、低（2.46、0.615g/kg）組，YS高、低（2.46、0.615

4、 g/kg）組。連續(xù)給藥20d。記錄腫瘤體積，計(jì)算相對(duì)腫瘤體積（RTV）及相對(duì)腫瘤增殖率（T/C％），取瘤體稱重計(jì)算抑瘤率、繪制出腫瘤生長(zhǎng)變化曲線。實(shí)驗(yàn)重復(fù)兩批。
　?、萑斯ぴ耘嗉耙吧呷~一枝花對(duì)人肝癌SMMC-7721裸鼠移植瘤細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期及誘導(dǎo)凋亡蛋白的作用：取裸鼠移植瘤組織，采用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測(cè)人工栽培品及野生品對(duì)SMMC-7721荷瘤裸鼠移植瘤細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的影響，蛋白印跡法（Western blot）檢

5、測(cè)SMMC-7721荷瘤裸鼠移植瘤中Bcl-2、Bax、Fas、Fas-l蛋白水平的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　?、資S品高中低組小鼠平均瘤重均明顯低于模型組（P＜0.01），平均抑瘤率分別為53.8%、44.8%、32.6%，并存在劑量關(guān)系。
　?、赮S品高中低組小鼠生存時(shí)間較模型組明顯延長(zhǎng)（P<0.01），平均生命延長(zhǎng)率分別53.2%、41.3%、31.3%，存在劑量依賴性。
　　③RG品與YS品各組小鼠平均瘤

6、重均明顯低于模型組（P＜0.01或P＜0.05），分別呈組間劑量依賴性，同劑量RG組與YS組抑瘤作用無(wú)明顯差異；RG-H、M、YS-H組小鼠胸腺指數(shù)明顯升高（P＜0.01或P＜0.05），同劑量RG組與YS組比胸腺指數(shù)無(wú)明顯差異；RG品與YS品對(duì)H22荷瘤小鼠脾臟指數(shù)無(wú)影響；RG與YS均能顯著提高H22小鼠血清中NK含量（P＜0.01或P＜0.05），同劑量RG品與YS品血清中NK含量無(wú)明顯差異。
　　④RG品與YS品相對(duì)腫瘤體積

7、變化明顯低于模型對(duì)照組（P＜0.01或P＜0.05），末次相對(duì)腫瘤增殖率T/C(%)分別為35.1%、47.4%、39.9%、64.5%。RG品與YS品均能明顯抑制裸鼠移植瘤生長(zhǎng)，同劑量RG組與YS組對(duì)裸鼠的移植瘤生長(zhǎng)作用無(wú)明顯差異。
　?、軷G品與YS品G0/G1期細(xì)胞比例明顯增加（P＜0.01或P＜0.05），同劑量RG品與YS品各組無(wú)明顯差異；RS品和YS品各組總凋亡率分別為67.9%、60.0%、60.5%，44.1%，較

8、模型組明顯增加（P＜0.01或P＜0.05），同劑量RG品與YS品無(wú)差異；RG品與YS品均能下調(diào)Bcl-2蛋白的相對(duì)表達(dá)量（P＜0.05），上調(diào)Fas、Fas-L蛋白相對(duì)表達(dá)量（P＜0.05），且同劑量RG組和YS組的蛋白相對(duì)量表達(dá)無(wú)明顯差異。
　　結(jié)論:
　?、資S品對(duì)肝癌H22小鼠實(shí)體瘤有明顯抑制作用。
　　②YS品能顯著提高肝癌H22腹水瘤小鼠的生存時(shí)間。
　?、跼G品和YS品均對(duì)肝癌H22小鼠實(shí)體瘤有明顯