核殼結(jié)構(gòu)磁性納米球的制備及其在蛋白分離純化中的應(yīng)用.pdf

1、隨著基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)的發(fā)展以及蛋白在治療學(xué)中的應(yīng)用，人們對于融合蛋白的需求日益增加。高效的蛋白分離純化手段也因而倍受青睞。磁性納米球（MNPs）由于巨大的比表面積、良好的分散性、大小可控、獨(dú)一無二的磁響應(yīng)性、易于分離等特點，在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。與目前商業(yè)用的微米級的磁珠相比，磁性納米球分離蛋白的效率高，非特異性吸附少，但是容易聚集，穩(wěn)定性差，甚至在復(fù)雜樣本中失去磁性，嚴(yán)重限制了它們的應(yīng)用。因此，很有必要開發(fā)一種穩(wěn)定性高，分散性好

2、、分離效率高而且能抵抗非特異性蛋白吸附的磁性納米球。
　　本研究分為兩個部分：第一部分，核殼結(jié)構(gòu)磁性納米球的制備。首先，通過溶劑熱法合成了大小均一的Fe3O4 MNPs，平均粒徑185 nm；其次，通過Stober法對Fe3O4 MNPs進(jìn)行包硅，提高Fe3O4 MNPs的化學(xué)穩(wěn)定性，所得Fe3O4@SiO2 MNPs粒徑約245 nm；然后，通過蒸餾沉淀聚合的方法，在Fe3O4@SiO2 MNPs表面修飾聚合物PHEMA；接著，

3、為了改善Fe3O4@SiO2@PHEMA MNPs水分散性，對聚合物刷進(jìn)行衍生化，接枝丁二酸酐、EDC/NHS活化羧基、NTA?；?，最終獲得單分散親水性 Fe3O4@SiO2@PHEMA-SA-NTA MNPs，水化半徑為255 nm，飽和磁化值為18.58 emug-1，金屬離子Ni2+的螯合量為34.37μg/mg。第二部分，磁性納米球分離純化蛋白的應(yīng)用研究。我們利用 BSA上的組氨酸基團(tuán)模擬His-tag與Fe3O4@SiO2@P

4、HEMA-SA-NTA-Ni2+MNPs之間的作用，經(jīng)考馬斯亮藍(lán)法測定蛋白負(fù)載量為124.87μg/mg；用正常HepG2細(xì)胞蛋白考察其抗非特異性蛋白吸附的能力，用穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系His-CAV1-HepG2細(xì)胞蛋白考察其分離純化His-tagged CAV1融合蛋白的性能， SDS-PAGE電泳和蛋白免疫印跡結(jié)果表明 Fe3O4@SiO2@PHEMA-SA-NTA-Ni2+MNPs具備一定的抗非特異性蛋白吸附作用和特異性分離富集His-ta