杜氏藻RAPD分析及耐鹽分子生物學(xué)初探.pdf

1、利用雙向電泳技術(shù)對培養(yǎng)在含不同鹽濃度條件下(NaCl,0.5mol/L、1.5mol/L、3.0mol/L)的巴氏杜氏藻(Dunaliella bardawil)細(xì)胞的總蛋白進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)在NaCl3.0mol/L的鹽濃度上巴氏杜氏藻出現(xiàn)新的特異蛋白,其pI值約為9.0,分子量約為62KD.將分別培養(yǎng)在上述不同濃度下的巴氏杜氏藻細(xì)胞RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA.用3條dT<,11>(A/C/G)錨定引物和12條隨機(jī)引物組合進(jìn)行擴(kuò)增,經(jīng)聚丙烯酰

2、胺凝膠電泳分離后,用銀染的方法進(jìn)行染色,可顯示它們之間的7條差異DNA條帶.從凝膠中回收差異DNA條帶并進(jìn)行再擴(kuò)增,將擴(kuò)增產(chǎn)物克隆進(jìn)pUCm-T載體.經(jīng)限制性核酸內(nèi)切酶檢定和RNA斑點雜交排除假陽性后得到一個重組質(zhì)粒pTE,其中含有分子量約為420bp的在高鹽下特異出現(xiàn)的條帶,它可能與該藻的調(diào)滲基因有關(guān).實驗表明,mRNA反轉(zhuǎn)錄差異顯示PCR是一種簡單、快捷、有效的分離差異表達(dá)基因的方法.利用上述420bp的cDNA將可能從巴氏杜氏藻基