茯苓不同藥用部位化學(xué)成分分析及赤茯苓質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究.pdf

1、茯苓為多孔菌科真菌茯苓Poria cocos(Schw.)Wolf的干燥菌核，不同藥用部位具有不同的功效作用：茯苓皮為干燥外皮，具有利水消腫的功效；赤茯苓為近外皮部的淡紅色部分，具有行水、利濕熱、益心潤(rùn)肺的功效；茯苓為削去外皮及切除赤茯苓后的白色部分，具有利水滲濕、健脾寧心的功效；茯神為中間天然抱有松根（即茯神木）的白色部分，具有養(yǎng)心安神、利水消腫、補(bǔ)虛治勞的功效。茯苓三萜類化合物是茯苓中主要有效成分之一，具有抗腫瘤、抗炎、利尿、免疫調(diào)

2、節(jié)等作用。目前茯苓研究?jī)H限于1種藥用部位或2種藥用部位，尚未對(duì)茯苓4種不同藥用部位進(jìn)行全面比較研究。本研究分為兩個(gè)部分：
　　第一部分：UPLC-QTOF-MS/MS技術(shù)同時(shí)鑒定、定量及比較茯苓4種不同藥用部位中茯苓三萜類化合物。
　　目的：建立UPLC-QTOF-MS/MS同時(shí)鑒定、定量茯苓三萜類化合物的方法，比較茯苓不同藥用部位茯神、茯苓、赤茯苓及茯苓皮的成分差異。
　　方法：電噴霧離子源，將8種茯苓三萜類化合物對(duì)

3、照品貯備液針泵到質(zhì)譜儀，在正負(fù)離子模式下，在不同的 CE水平上分析[M+H]+、[M-H]-離子碎片行為，總結(jié)其質(zhì)譜裂解規(guī)律；基于UPLC-QTOF-MS/MS技術(shù)， Phenomenex-C18色譜柱（150 mm×2 mm,3μm），以乙腈和水-0.1％甲酸-2 mmol/L乙酸銨溶液流動(dòng)相，流速0.3 mL/min，梯度洗脫，同時(shí)鑒定、定量茯苓不同藥用部位茯神、茯苓、赤茯苓及茯苓皮中茯苓三萜類化合物，應(yīng)用PeakView2.1和M

4、ultiQuant3.0軟件分別對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行定性及定量分析；應(yīng)用MarkerView1.2.1軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行PCA聚類分析及t-檢驗(yàn)。
　　結(jié)果：總結(jié)了8種茯苓三萜類化合物（1個(gè)羊毛甾-8-烯型三萜、4個(gè)羊毛甾-7,9(11)-二烯型三萜、3個(gè)3,4-開(kāi)環(huán)-羊毛甾-7,9(11)-二烯型三萜）的質(zhì)譜裂解規(guī)律，據(jù)此推斷3,4-開(kāi)環(huán)-羊毛甾-8-烯型三萜質(zhì)譜裂解規(guī)律；鑒定出茯苓三萜類化合物51個(gè)，其中茯神中44個(gè)化合物，茯苓中46個(gè)化合

5、物，赤茯苓中40個(gè)化合物，茯苓皮中39個(gè)化合物；49種茯苓三萜類化合物含量總和和大部分單一茯苓三萜類化合物在不同藥用部位中的含量均是茯苓皮＞赤茯苓＞茯神＞茯苓；通過(guò)PCA法尋找的茯神、茯苓、赤茯苓、茯苓皮差異化合物為茯苓新酸D、松苓酸，通過(guò)t-檢驗(yàn)尋找的茯神與茯苓、赤茯苓、茯苓皮的差異化合物為26-羥基茯苓新酸G、16α-乙酰氧基-羊毛甾-8,24-二烯-21酸、羊毛甾-7,9(11),24-三烯-21-酸，茯苓與茯神、赤茯苓、茯苓皮間

6、無(wú)差異化合物，赤茯苓與茯神、茯苓、茯苓皮的差異化合物為茯苓新酸 B、羊毛甾-7,9(11),24-三烯-21-酸，茯苓皮與茯神、茯苓、赤茯苓差異化合物為松苓酸、茯苓新酸B；按形態(tài)學(xué)由里及表的順序茯神、茯苓、赤茯苓、茯苓皮中3,4-開(kāi)環(huán)-羊毛甾三萜類化合物含量相對(duì)增高，而閉環(huán)羊毛甾三萜類化合物含量相對(duì)降低。
　　結(jié)論：建立了UPLC-QTOF-MS/MS同時(shí)鑒定、定量茯神、茯苓、赤茯苓、茯苓皮中茯苓三萜類化合物的方法，該法簡(jiǎn)單、靈敏

7、、專屬，實(shí)現(xiàn)了一針進(jìn)樣同時(shí)定性定量分析，并比較分析了茯苓不同藥用部位中茯苓三萜類化合物含量差異，為不同藥用部位藥理機(jī)制的闡明提供理論依據(jù)。
　　第二部分：赤茯苓質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。
　　目的：建立赤茯苓質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，有效控制赤茯苓質(zhì)量。
　　方法：參考《中國(guó)藥典》2015年版四部通則，對(duì)12批赤茯苓樣品進(jìn)行分析。通過(guò)查閱文獻(xiàn)對(duì)赤茯苓進(jìn)行本草考證，采用性狀鑒別法、顯微鑒別法、薄層鑒別法進(jìn)行鑒別，測(cè)定水分、總灰分、酸不溶性灰分含量進(jìn)

8、行檢查，采用熱浸法測(cè)定浸出物含量。
　　結(jié)果：確定了赤茯苓基源；赤茯苓性狀特征為呈立方塊狀或方塊狀厚片，大小不一，淺棕色或棕色，質(zhì)堅(jiān)實(shí)，氣微，味淡，嚼之粘牙；粉末顯微特征為本品粉末淺棕色或棕色，不規(guī)則顆粒狀團(tuán)塊和分枝狀團(tuán)塊棕紅色，菌絲淺棕色、棕色或深棕色，細(xì)長(zhǎng)，稍彎曲，有分枝，直徑2~8μm，少數(shù)至11μm，長(zhǎng)短不一；薄層色譜鑒別顯示4種不同藥用部位的6個(gè)主斑點(diǎn)顯色清晰，分離度達(dá)到要求，尤其將茯苓和赤茯苓明顯區(qū)分，該分離條件受溫度

9、和濕度影響較?。凰譁y(cè)定結(jié)果為9.0%~17.2%，平均值為14.0%；總灰分測(cè)定結(jié)果為0.5%~1.4%，平均值為0.9%；酸不溶性灰分測(cè)定結(jié)果分別為0.1%~0.9%，平均值為0.4%；醇溶性浸出物測(cè)定結(jié)果為6.6%~18.6%，平均值為11.6%。
　　結(jié)論：總結(jié)了赤茯苓性狀和粉末顯微鑒別特征；建立了具有良好專屬性及耐用性的薄層色譜鑒別方法；制定了水分、總灰分、酸不溶性灰分、浸出物的限度，進(jìn)而建立了赤茯苓質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為有效控制