熊果酸對酒精性骨質(zhì)疏松大鼠骨形成、骨礦化及腸道菌群的影響.pdf

1、目的：
　　通過觀察熊果酸對酒精性骨質(zhì)疏松大鼠股骨骨密度(BMD)、骨鈣素(BGP)、骨形成蛋白-2(BMP-2)、血清鈣、磷及炎性細(xì)胞因子TNF-α和IL-1β等的影響，初步探討熊果酸對酒精所致骨質(zhì)疏松大鼠的作用及可能機(jī)制，并分析熊果酸對酒精性骨質(zhì)疏松大鼠腸道菌群多樣性的影響。
　　方法：
　　1.動(dòng)物分組及給藥：2月齡SPF級雄性Wistar大鼠90只，大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7d后，按體重隨機(jī)分為6組（分別為：正常對照組、

2、熊果酸對照組、酒精模型組、熊果酸低、中、高劑量組），每組15只，分籠喂養(yǎng)，每日自由進(jìn)水，進(jìn)食。酒精模型組大鼠每日給予50%(V/V)酒精8mL/kg·bw·d，灌胃2周后，劑量提升至12mL/kg·bw·d，繼續(xù)灌胃6周；正常對照組每日灌胃給予生理鹽水；熊果酸對照組每日給予150mg/kg·bw·d熊果酸；熊果酸低、中、高劑量組每日分別灌胃給予50、100、150mg/kg?bw?d熊果酸，酒精劑量同模型組；實(shí)驗(yàn)共持續(xù)8周，并記錄大鼠每

3、周體重，以調(diào)整酒精及熊果酸灌胃量。末次灌胃給藥后禁食不禁水12小時(shí)，3%戊巴比妥鈉麻醉，腹主動(dòng)脈取血，剝離股骨固定。
　　2.股骨病理學(xué)觀察：HE染色觀察大鼠股骨的病理學(xué)變化。
　　3.股骨骨密度(BMD)測定：DEXA骨密度儀檢測股骨骨密度。
　　4.采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測大鼠血清骨鈣素(BGP)、骨形成蛋白-2(BMP-2)濃度的水平。
　　5.采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測大鼠血清炎性細(xì)

4、胞因子腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和白介素-β(IL-1β)含量
　　6.比色法測定血清鈣(Ca)濃度；磷鉬酸法測定血清磷(P)濃度。
　　7.采用DGGE-PCR技術(shù)對糞便腸道菌群進(jìn)行指紋圖譜聚類性分析。
　　結(jié)果：
　　1.HE染色觀察結(jié)果：正常對照組大鼠骨小梁致密、規(guī)則且較粗，粗細(xì)均勻；而酒精模型組大鼠骨小梁稀松、不規(guī)則、粗細(xì)不均勻，甚至可見骨小梁斷裂；熊果酸中、高劑量組與酒精模型組大鼠相比較，骨小梁致密

5、、規(guī)則、較厚、粗細(xì)均勻，未見骨小梁斷裂；熊果酸低劑量組大鼠改善不明顯。
　　2.股骨骨密度：與正常對照組相比較，酒精模型組大鼠的股骨BMD明顯降低，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。但經(jīng)8周熊果酸干預(yù)后，可見除熊果酸低劑量組外，熊果酸中、高劑量組大鼠股骨BMD均明顯升高，與酒精模型組相比，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。
　　3.血清BGP、BMP-2結(jié)果：酒精模型組與正常對照組相比，BGP含量明顯降低，且差異具有統(tǒng)計(jì)

6、學(xué)意義（P＜0.05）；熊果酸中、高劑量組與酒精模型組相比較，BGP含量均有所升高，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但熊果酸低劑量組與酒精模型組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，僅具有數(shù)值上的升高。酒精模型組與正常對照組相比，可見模型組大鼠血清BMP-2含量明顯降低，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而熊果酸高劑量組與酒精模型組相比，血清BMP-2含量明顯升高，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），但熊果酸低、中劑量組血清BMP-2水平變化不大，與酒

7、精模型組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　4.血清Ca、P結(jié)果：酒精模型組大鼠血清Ca、P水平均有明顯降低，與正常對照組相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與酒精模型組相比較，熊果酸中、高劑量組血清Ca和P含量明顯回升，且均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），但熊果酸低劑量組Ca、P含量雖有數(shù)值上的增加，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　5.血清TNF-α和IL-1β結(jié)果：相對于正常對照組，酒精模型組TNF-α和IL-1β的水平明顯升高，差異具

8、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而熊果酸干預(yù)后顯著抑制了炎性因子的升高，與酒精模型組相比較，TNF-α和IL-1β的水平顯著下降，其中熊果酸高劑量組作用明顯，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。
　　6.腸道菌群DGGE-PCR指紋圖譜分析：酒精模型組大鼠腸道菌群多樣性明顯減少且與正常組的相似性較低；而熊果酸高劑量組大鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)更加接近于正常組。
　　結(jié)論：
　　1.通過對大鼠股骨骨密度測定及股骨病理學(xué)觀察，初步證實(shí)熊