再生絲素蛋白材料血管細(xì)胞共培養(yǎng)的研究.pdf

1、多數(shù)心腦血管疾病例如血栓、動(dòng)脈硬化、血管老化等需要進(jìn)行血管替換，臨床上已有人體血管替代品，但是主要是大口徑血管替代。小口徑血管（內(nèi)徑<6mm)還沒(méi)有理想的替代品應(yīng)用于臨床。前期我們已經(jīng)利用具有良好生物相容性的絲素蛋白和具有良好力學(xué)性能的絲素纖維為原料，制備具有內(nèi)、中、外膜三層結(jié)構(gòu)的小口徑仿生管狀支架，同時(shí)通過(guò)改變制備條件（冷凍溫度、絲素溶液濃度、交聯(lián)比例）對(duì)管狀支架結(jié)構(gòu)和力學(xué)性能進(jìn)行了優(yōu)化。為了深入解析絲素蛋白管狀支架在替代缺損血管后組

2、織重建及其機(jī)制，我們進(jìn)行了再生絲素蛋白材料上血管細(xì)胞體外共培養(yǎng)的研究。
　　本文中我們采用兩種再生絲素蛋白材料，即再生絲素蛋白膜和再生絲素蛋白管狀支架作為研究對(duì)象，研究其作為血管細(xì)胞（人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，ECs;人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞，SMCs;人主動(dòng)脈成纖維細(xì)胞，HAFs)共培養(yǎng)載體時(shí)，材料以及細(xì)胞間作用對(duì)細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞增殖以及細(xì)胞功能因子表達(dá)的影響。
　　首先進(jìn)行了再生絲素蛋白膜上血管細(xì)胞共培養(yǎng)的研究，采用倒置熒光顯微鏡觀察和

3、DNA含量分析法分別研究了細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞增殖，結(jié)果表明：絲素蛋白膜上血管細(xì)胞保持正常的形態(tài)，培養(yǎng)期間單獨(dú)培養(yǎng)的血管細(xì)胞數(shù)量持續(xù)增加，同時(shí)共培養(yǎng)的血管細(xì)胞總數(shù)量也持續(xù)增加，且組間無(wú)顯著性差異。
　　免疫熒光分析表明：共培養(yǎng)條件下，EC和 SMC可以共同生長(zhǎng)，EC在細(xì)胞數(shù)量上占優(yōu)勢(shì)；同樣的，共培養(yǎng)條件下，HAF和 SMC可以共同生長(zhǎng)，HAF在細(xì)胞數(shù)量上占優(yōu)勢(shì)；絲素蛋白膜對(duì)SMC表達(dá)a-SMA的表達(dá)有一定的抑制作用；與EC共培養(yǎng)可以促進(jìn)

4、SMC表達(dá)a-SMA;絲素蛋白膜對(duì)EC表達(dá)CD31的表達(dá)有一定的抑制作用。
　　實(shí)時(shí)熒光定量PCR研究對(duì)絲素材料以及細(xì)胞間作用對(duì)細(xì)胞功能因子表達(dá)的影響，結(jié)果表明：絲素蛋白膜對(duì)血管平滑肌細(xì)胞功能因子a-SMA和 SM-MHC的表達(dá)有一定的抑制作用，但與血管內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)能時(shí)卻能促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞a-SMA和SM-MHC的表達(dá)；絲素蛋白膜及與血管平滑肌細(xì)胞共培養(yǎng)對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能因子VEGF和 CD31的表達(dá)均有促進(jìn)作用；與血管成纖維

5、細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)也能促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞a-SMA和 SM-MHC的表達(dá)。
　　作為血管缺損血管替代的絲素蛋白管狀支架與絲素蛋白膜具有不同的組織結(jié)構(gòu)，本文進(jìn)一步開(kāi)展了絲素蛋白管狀支架上血管細(xì)胞共培養(yǎng)的研究。研究結(jié)果表明：絲素蛋白管狀支架可以很好的支持血管內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞的粘附、鋪展以及增殖；支架上共培養(yǎng)血管內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞時(shí)，對(duì)血管平滑肌細(xì)胞的功能因子SM-MHC的表達(dá)有顯著促進(jìn)作用，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，a-SMA的表達(dá)