白藜蘆醇和褪黑素對(duì)奶牛性控凍精精子質(zhì)量和體外受精能力的影響.pdf

1、利用流式分選的奶牛性控凍精人為控制犢牛出生后的性別，可實(shí)現(xiàn)畜牧生產(chǎn)利潤(rùn)最大化;同時(shí)，性控凍精在商業(yè)化的體外性控胚胎生產(chǎn)中起重要作用。但性控凍精分選過程會(huì)去除富含抗氧酶的精漿，導(dǎo)致內(nèi)源性抗氧化酶的不足，同時(shí)刺激精子氧化應(yīng)激產(chǎn)生過量的活性氧(ROS)，破壞精子內(nèi)部抗氧化防御體系的平衡，造成精子氧化應(yīng)激損傷。褪黑素(MT)和白藜蘆醇(Res)作為高效的外源性抗氧化劑，可去除ROS，提高常規(guī)凍精質(zhì)量，但在奶牛性控凍精中的研究非常罕見。因此，本研

2、究通過在3頭荷斯坦奶牛性控凍精解凍后的洗精液和受精液中添加不同濃度的Res和MT處理，檢測(cè)了不同濃度抗氧化劑對(duì)性控凍精質(zhì)量和受精能力的影響，探究了這兩種抗氧化劑在奶牛性控凍精中的最佳作用濃度，并應(yīng)用MT受體抑制劑，探究了MT受體對(duì)精子受精能力的影響。研究結(jié)果如下:
　　1.在3頭牛性控凍精解凍后，在其洗精液和受精液中分別添加不同濃度的Res(0M、10-3M、10-4M、10-5M、10-6M)，經(jīng)15h孵育后，分析了不同濃度的R

3、es處理對(duì)奶牛性控凍精ROS水平、磷脂酰絲氨酸(PS)外翻、線粒體膜電位(△ψm)、ATP和丙二醛(MDA)含量、頂體完整性、以及囊胚率和囊胚質(zhì)量的影響。結(jié)果表明:(1)10-3M和10-4M的Res處理組精子的ROS和MDA水平顯著低于對(duì)照組(P＜005);(2)10-3M和10-4M的Res處理組中未發(fā)生凋亡活精子和高△ψm，以及較高ATP含量的精子比例顯著高于對(duì)照組(P＜0.05);(3)10-4M Res處理組頂體完整的活精子比

4、例以及囊胚率和囊胚質(zhì)量顯著高于對(duì)照組(P＜005）。因此，在性控凍精洗精液和受精液中添加10-4M Res處理可顯著降低其ROS水平、PS外翻比例、MDA水平，并保護(hù)線粒體功能和頂體完整性，從而提高性控凍精囊胚率和囊胚質(zhì)量。
　　2.在3頭牛性控凍精解凍后，在洗精液和受精液中分別添加不同濃度MT(0M、10-3M、10-5M、10-7M、10-9M)，經(jīng)15h孵育后，分析了不同濃度的MT處理對(duì)奶牛性控凍精ROS水平、MDA水平、凋

5、亡事件（PS外翻、△ψm）、內(nèi)源性抗氧化酶(GSH-Px、SOD、CAT)活力水平、頂體膜完整性、獲能及獲能相關(guān)事件（胞內(nèi)Ca2+水平，[Ca2+]1;環(huán)磷酸腺苷水平，cAMP水平）;以及IVF能力的影響。結(jié)果表明:10-5M MT處理可顯著降低性控凍精ROS含量，提高GSH-Px、SOD、CAT酶活力水平，從而抑制精子PS外翻和MDA水平，提高精子△ψm、頂體完整性、獲能反應(yīng)相關(guān)變化和受精能力。
　　3.通過Western Bl

6、ot確定奶牛性控精子中MT1和MT2受體的存在，以及根據(jù)實(shí)驗(yàn)證實(shí)10-5MMT可有效提高性控凍精受精能力，10-5M MT處理3頭牛的性控凍精時(shí)分別添加MT受體抑制劑4-P-POD和Luzindole，檢測(cè)對(duì)性控凍精精子獲能相關(guān)事件的影響。結(jié)果顯示:MT通過MT1受體參與奶牛性控凍精精子獲能調(diào)節(jié)。
　　綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)10-4M Res和10-5M MT都可通過清除ROS，抑制凋亡和脂質(zhì)過氧化反應(yīng)(LPO)，保護(hù)精子結(jié)構(gòu)與功能