丹皮酚對潰瘍性結(jié)腸炎的治療效果及機制研究.pdf

1、目的:
　　潰瘍性結(jié)腸炎是一類臨床常見疾病，目前缺乏較好的治療方法，本研究在臨床實踐中發(fā)現(xiàn)了丹皮酚(Pae)注射液治療潰瘍性結(jié)腸炎的療效顯著。本文觀察其臨床效果，并對其作用機制進行研究，為潰瘍性結(jié)腸炎的臨床治療提供可參考的新方向。
　　方法:
　　采用臨床實驗結(jié)合動物實驗，通過丹皮酚注射液對潰瘍性結(jié)腸炎患者的臨床治療，觀察其臨床治療效果;通過動物實驗，探究其可能存在的作用機理。全文實驗共分為五部分:(1)丹皮酚對潰瘍性

2、結(jié)腸炎的臨床療效觀察。選取2015年1月-2016年9月鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院消化內(nèi)科收治的80例潰瘍性結(jié)腸炎患者作為研究對象，分為對照組(40例)和治療組(40例)。對照組采用常規(guī)藥物（美沙拉嗪或潑尼松片）治療;治療組在常規(guī)藥物治療的基礎(chǔ)上給予肌內(nèi)注射丹皮酚注射液。治療周期14天，觀察指標包括血小板水平、血紅蛋白水平、白蛋白水平、C反應(yīng)蛋白水平、紅細胞沉降速率、機體氧化應(yīng)激水平、炎性因子含量變化情況及ICAM-1、MMP-9蛋白表達水平

3、，評價療效;(2)丹皮酚對葡聚糖硫酸鈉(DSS)誘導(dǎo)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型的保護作用。利用DSS誘導(dǎo)制備潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型，隨機分為對照組、模型組、丹皮酚（低、高）劑量組及陽性對照組，觀察大鼠一般狀態(tài)、體重變化情況及疾病活動指數(shù)(DAI)，ELISA法檢測血清炎性因子水平，血漿MDA和SOD水平，RT-PCR法檢測結(jié)腸組織炎性因子mRNA表達水平，Western Blot法檢測結(jié)腸粘膜組織ICAM-1、MMP-9蛋白表達水平，并評價組織

4、損傷程度;(3)丹皮酚對DSS誘導(dǎo)所致腸炎的抗炎效果及機制研究。利用DSS誘導(dǎo)制備潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型，隨機分為對照組、模型組、丹皮酚(低、中、高劑量）組及陽性對照組，ELISA法測定大鼠血清炎性因子水平，RT-PCR法測定大鼠血清炎性因子mRNA表達水平，Western Blot法測定NF-κB和MAPK信號通路蛋白表達水平;(4)丹皮酚對大鼠CD4+T細胞亞群及其相關(guān)細胞因子表達的影響及機制研究。利用DSS誘導(dǎo)制備潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模

5、型，隨機分為正常對照組、模型組、丹皮酚治療組，流式細胞儀檢測CD4+T細胞亞群Th1、Th2、Th17和Treg細胞的比例，RT-PCR法檢測CD4+T細胞各亞型轉(zhuǎn)錄因子的表達，抗體芯片檢測CD4+T各細胞因子的表達，免疫組織化學(xué)染色法檢測大鼠結(jié)腸粘膜組織Th1、Th2、Th17和Treg細胞的表達，Western Blot法測定IL-23R/Jak2/Stat3信號通路蛋白表達水平;(5)丹皮酚對模型大鼠腸黏膜相關(guān)生長因子的影響。利用

6、DSS誘導(dǎo)制備潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型，隨機分為對照組、模型組、丹皮酚（低、高劑量）組及陽性對照組，SABC免疫組化染色法觀察大鼠腸黏膜平均血管密度，MASSON染色法觀察腸黏膜血管微血栓形成，ELISA法檢測血漿及結(jié)腸黏膜血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、成纖維細胞生長因子(bFGF)、血小板衍生因子(PDGF)水平，放射免疫分析法測定血漿及結(jié)腸一氧化氮(NO)水平，Western Blot法測定血漿及結(jié)腸缺氧誘導(dǎo)因子(HIF-1)水平。

7、r>　　結(jié)果:
　　(1)丹皮酚可有效改善患者的臨床癥狀，改善腸黏膜病變，消除并發(fā)癥，降低血小板、C反應(yīng)蛋白濃度，降低紅細胞沉降速率，降低ICAM-1、MMP-9蛋白表達水平，提高血紅蛋白、白蛋白水平，同時不會引起嚴重的不良反應(yīng);(2)丹皮酚注射液可有效抑制大鼠體重下降趨勢，改善模型大鼠DAI指數(shù)，降低體內(nèi)IL-1、IL-4、INF-γ、TNF-α及氧化應(yīng)激水平，提高IL-10水平，同時對炎性因子mRNA表達具有調(diào)節(jié)作用，降低IC

8、AM-1、MMP-9蛋白的表達，改善大鼠腸黏膜平均血管密度，抑制微血栓形成;(3)丹皮酚可以顯著抑制DSS誘導(dǎo)的實驗性腸炎大鼠促炎癥因子IL-1β、IL-4、IL-6、IFN-γ、TNF-α和MCP-1及其mRNA的表達，免疫印跡結(jié)果顯示，丹皮酚可抑制NF-κB通路p-IκB、p-p65、p-IKKα/β水平和MAPK通路中p-Erk1/2、p-JNK、p-p38水平，從而抑制NF-κB通路和MAPK通路活性;(4)丹皮酚可提高CD4+

9、T細胞亞型Treg細胞的比例，下調(diào)Th1、Th2和Th17細胞的比例，提高FoxP3的表達水平，下調(diào)GATA-3、RORc及T-bet表達水平，降低細胞因子IL-2、IL-4、IL-21和IL-17表達水平。抑制IL-23R和JAK-2蛋白的表達，并抑制stat3磷酸化，促進smad磷酸化，由此抑制IL-23R/Jak2/Stat3信號通路活性;(5)丹皮酚注射液可有效改善模型大鼠腸黏膜平均血管密度及腸黏膜血管微血栓形成個數(shù)，降低血漿及

10、結(jié)腸組織VEGF、NO、bFGF及HIF-1水平。
　　結(jié)論:
　　(1)丹皮酚注射液對潰瘍性結(jié)腸炎具有較好的治療效果，治療機制可能與減低體內(nèi)氧化應(yīng)激、炎性因子水平及血管細胞因子的表達有關(guān);(2)丹皮酚對模型大鼠的保護作用可能是通過降低氧化應(yīng)激水平及炎性因子mRNA的表達，消除炎癥反應(yīng)，抑制ICAM-1、MMP-9蛋白的表達，改善腸道及血管功能，從而起到對模型大鼠的保護作用;(3)丹皮酚可降低腸炎模型大鼠炎性水平，其作用機制