陸地棉皺縮葉突變體基因wr3的初步定位.pdf

1、棉花是世界最重要的纖維作物，也是我國紡織工業(yè)所必需的天然原料。皺葉突變體性狀表現(xiàn)明顯，表型穩(wěn)定，容易區(qū)分，在突變體庫的構建和經(jīng)典遺傳學基因定位上具有重要作用。國內外關于棉花皺縮葉突變體的報道比較多，但關于皺縮葉突變體的基因定位都僅限于經(jīng)典遺傳學方法分析，因形態(tài)標記數(shù)目太少，尚無法定位到特定染色體上。本研究采用本項目組在陸地棉群體中自主發(fā)現(xiàn)的一種新的皺葉突變體為試驗材料，前期的遺傳規(guī)律的分析研究發(fā)現(xiàn)，該皺縮葉突變體的表型與國內外已報道的皺

2、縮葉不同，其遺傳方式符合孟德爾遺傳規(guī)律，是受一對完全隱性基因wr3控制的質量性狀。本研究進一步以該皺葉突變自交系L037和海7124為親本配置了海陸雜交F2群體，利用SSR分子標記技術對皺縮葉基因wr3進行了初步定位，獲得的主要實驗結果如下:
　　1、F2作圖群體性狀調查及分離規(guī)律研究
　　以正常葉海島棉品種“海7124”為母本，皺縮葉突變體自交系L037為父本進行雜交獲得F1，然后F1自交獲得F2分離群體。在皺縮葉性狀明顯

3、表達的初花期，對150株F2群體的表型性狀進行統(tǒng)計，結果顯示，表現(xiàn)為皺縮葉性狀的隱性個體共43株，正常葉個體共107株，F(xiàn)2群體的分離擬合正常葉∶皺縮葉=3∶1的孟德爾理論分離比例（x2=0.334＜x20.05，1=3.84），從海陸雜交群體進一步驗證了本實驗室前期關于此皺縮葉突變體遺傳規(guī)律的相關研究的正確性。
　　2、遺傳連鎖群的構建
　　利用240對SSR引物對皺葉親本L037和海7124進行PCR擴增，篩選具有多態(tài)性

4、的引物，共獲得123對多態(tài)性較為清晰的引物，多態(tài)率達51.25％。利用這些引物檢測F2作圖群體92個單株的標記基因型，共獲得134個SSR標記差異位點。利用Joinmap4.0對134個多態(tài)性位點進行連鎖遺傳分析，構建了得到包括95個位點的23個連鎖群，連鎖群長度1.1-108.2cM不等，圖譜總長631.3cM，約覆蓋棉花基因組的17.17％;標記間平均距離為6.79cM;每個連鎖群平均有4.04個標記，平均長27.44cM。23個連

5、鎖群分別定位到除A10(Chr10)、A11(Chr11)、D10(Chr20)、D13(Chr18)外其余的22條染色體上。但在此引物系統(tǒng)中沒有與目標基因連鎖的引物。
　　3、皺縮葉突變體基因wr3的初步定位
　　進一步利用本實驗遴選的平均覆蓋棉花26對染色體上的234對SSR引物（每染色體相對等距離分布9對引物），通過BSA法進行二次多態(tài)性篩選，共得到12對多態(tài)性引物。檢測F2作圖群體每個單株的基因型，連鎖分析結果顯示引

6、物BNL3279與目的基因連鎖，二者間的遺傳距離為28.7cM。隨后對標記BNL3279所在的Chr.21(D11)上的引物進一步篩選，共得到16對連鎖引物，目的基因wr3位于引物NAU3740和cgr5428之間，遺傳距離分別為4.8cM和10.4 cM，由此推斷，皺縮葉突變體基因wr3在棉花Chr.21(D11)上。
　　4、SSR標記的偏分離檢驗
　　本實驗過程中共獲得了150個標記位點的數(shù)據(jù)信息，卡方測驗結果表明，1