新生期肌肉注射GLP-1質粒影響青年大鼠行為和海馬GR表達.pdf

1、本研究在大鼠出生后發(fā)育的關鍵窗口期(第2天)肌肉注射GLP-1質粒，在大鼠達到青年期性成熟時(54天)采用高架十字迷宮法檢測了青年大鼠的焦慮樣行為，8周齡(56天)時屠宰采集血漿、腎上腺、海馬，腎上腺稱重、并計算腎上腺指數(shù).采用酶免法(EIA)測定血漿皮質酮含量，用實時定量RT-PCR(real time RT-PCR)方法檢測海馬GR、DNMT1、GLP-1R、NGFI-A基因mRNA表達，用Western blot方法檢測海馬GR和

2、DNMT1蛋白表達，最后用亞硫酸氫鹽測序法(BSP)檢測GR啟動子exon17的甲基化水平，以揭示GLP-1調控海馬GR表達、進而程序化影響青年大鼠行為的分子機制。 1.青年大鼠焦慮樣行為檢測 高架十字迷宮(elevated plus maze，EPM)結果表明注射GLP-1質粒(GLP-1Plasmid, GP)的大鼠進入開臂的次數(shù)(OE％,P=.024)和在開臂待的時間(OT％，P=.021)都顯著高于注射空白質粒(

3、Vacant Plasmid，VP)的大鼠，表現(xiàn)明顯的抗焦慮樣行為；然而，GP組大鼠進入開臂和閉臂的總次數(shù)(OE+CE，P=.011)顯著低于VP組大鼠，表明其運動活力顯著下降。 2.腎上腺指數(shù)和血漿皮質酮檢測 兩組大鼠腎上腺指數(shù)未表現(xiàn)有顯著差異(P=.172)。酶免法(enzymeimmunoassay，EIA)測定皮質酮結果表明，GP組大鼠血漿皮質酮水平有所提高，但差異也不顯著(P=.42)。 3.海馬GR

4、mRNA和蛋白表達 鑒于海馬GR在動物焦慮樣行為中起著重要的調節(jié)作用，本實驗檢測了海馬GRmRNA和蛋白水平。GP組大鼠海馬GR mRNA表達顯著高于VP組大鼠(P=.01)，GR蛋白表現(xiàn)升高的趨勢(P=.119)。 4.海馬DNMT1 mRNA和蛋白表達 為分析GP組海馬GR表達上調是否與DNA甲基化有關，本實驗檢測了大鼠海馬DNMT1表達，發(fā)現(xiàn)GP組海馬DNMT1 mRNA(P=.024)和蛋白水平(P=.0

5、09)均顯著低于VP組大鼠。提示DNA甲基化可能參與GR轉錄調控。 5.海馬GR啟動子DNA甲基化水平檢測 提取GP組和VP組大鼠海馬基因組DNA后，采用亞硫酸氫鹽測序法檢測GR exon17啟動子區(qū)域甲基化水平，克隆測序結果表明在轉錄因子NGFI-A結合的兩個CpG位點均沒有甲基化，其他15個CpG位點也只有零星的甲基化.提示GR exon17啟動子區(qū)域DNA甲基化可能不參與GLP-1導致的GR轉錄上調。 6.