2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:研究AUR(auraptene,橙皮油素)的肝保護(hù)作用及其分子藥理學(xué)機(jī)制。
  方法:(1)AUR通過(guò)激活FXR(farnesoid X receptor,法尼醇X受體)對(duì)LCA(lithocholic acid,石膽酸)誘導(dǎo)的小鼠膽汁淤積性肝損傷的保護(hù)作用。采用計(jì)算機(jī)二維虛擬技術(shù)對(duì)天然小分子庫(kù)進(jìn)行FXR激動(dòng)劑的篩選,并通過(guò)分子對(duì)接和雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)考察所篩選出的化合物AUR對(duì)FXR的激活作用。通過(guò)腹腔注射LCA誘導(dǎo)小

2、鼠膽汁淤積模型,以血清轉(zhuǎn)氨酶和膽汁酸水平以及H&E(hematoxylin-eosin,蘇木精-伊紅)染色評(píng)價(jià)AUR對(duì)LCA所致膽汁淤積性肝損傷的保護(hù)作用;采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定小鼠血清、肝臟及小腸中總膽汁酸水平,在組織水平上揭示AUR對(duì)膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程的調(diào)節(jié)作用;測(cè)定膽汁酸攝取型轉(zhuǎn)運(yùn)體Ntcp(Na+/taurocholate cotransporting polypeptide,Na+-牛磺膽酸鹽共轉(zhuǎn)運(yùn)多肽)、Bsep(bile

3、 salt export pump,外排轉(zhuǎn)運(yùn)體膽酸鹽外排泵)、Mrp2(multidrug resistance-related protein2,多藥耐藥相關(guān)蛋白2)、膽汁酸合成酶Cyp7a1(cholesterol7α-hydroxylase,膽固醇7α-羥化酶)、Cyp8b1(sterol12α-hydroxylase,甾醇12α-羥化酶)和膽汁酸代謝酶Sult2a1(hydroxysteroid sulfotransferase

4、2a1,羥基類(lèi)固醇磺酸轉(zhuǎn)移酶2a1)的表達(dá)水平,在分子水平揭示AUR對(duì)肝內(nèi)膽汁酸相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)體、合成酶及代謝酶的調(diào)節(jié)機(jī)制;以肝臟切片的BrdU(5-bromo-2-deoxyuridine,5-溴脫氧尿嘧啶核苷)染色及FoxM1b(forkhead box M1b,叉頭轉(zhuǎn)錄因子M1b)、Cyclin D1、Cyclin B1的表達(dá)水平為指標(biāo),考察AUR促進(jìn)肝細(xì)胞增殖的作用機(jī)制;通過(guò)炎癥相關(guān)基因NF-κB p65(nuclear factor

5、-κB p65,核因子-κB p65)、TNF-α(tumor necrosis factor-α,腫瘤壞死因子-α)、IL-1β(interleukin-1β,白介素-1β)和IL-6的表達(dá)情況來(lái)考察AUR的抗炎作用;采用FXR拮抗劑GS(guggulsterone,沒(méi)藥甾酮)以及FXR siRNA試驗(yàn)分別在體內(nèi)、體外水平驗(yàn)證AUR的抗膽汁淤積性肝損傷是否依賴FXR的調(diào)節(jié)。
  (2)AUR對(duì)TAA(thioacetamide,

6、硫代乙酰胺)所致小鼠肝纖維化的保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)期間,每周一、三、五腹腔注射TAA誘導(dǎo)小鼠肝纖維化模型,同時(shí)每周二、四、六灌胃給予小鼠AUR進(jìn)行干預(yù),連續(xù)給藥8周。以小鼠體重增長(zhǎng)情況、肝重及肝重/體重比評(píng)價(jià)TAA對(duì)肝臟損傷的嚴(yán)重程度和AUR的保護(hù)作用。以血清ALT(alanine aminotransferase,谷丙轉(zhuǎn)氨酶)、AST(aspartate transaminase,谷草轉(zhuǎn)氨酶)、TBIL(total bilirubin,總膽

7、紅素)、TB(total bile acids,總膽汁酸)、TC(total cholesterol,總膽固醇)、TG(triglycerides,甘油三酯)及肝臟切片H&E染色為評(píng)價(jià)指標(biāo),考察AUR對(duì)TAA所致小鼠肝損傷的保護(hù)作用;測(cè)定膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)體及合成酶的表達(dá)水平,評(píng)價(jià)AUR對(duì)肝內(nèi)膽汁酸水平的調(diào)節(jié)機(jī)制;以肝臟切片Masoon染色、TGF-β1(transforming growth factor-β1,轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1)、α-SM

8、A(α-smooth muscle actin,α-平滑肌肌動(dòng)蛋白)、TIMP-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,組織金屬蛋白酶-1抑制劑)和COL1-α1(collagenⅠ-α1,Ⅰ型膠原-α1)的表達(dá)情況,考察AUR抗纖維化的作用;測(cè)定炎性相關(guān)因子TNF-α、IL-1β以及FXR靶基因NF-κB的表達(dá),評(píng)價(jià)AUR對(duì)TAA所致肝臟炎性反應(yīng)的作用機(jī)制。通過(guò)FXR拮抗劑GS以及FXR s

9、iRNA試驗(yàn)分別在體內(nèi)、體外水平驗(yàn)證FXR在AUR抗TAA所致肝纖維化中的作用。
  (3)AUR對(duì)CCl4所致小鼠化學(xué)性肝損傷的預(yù)防作用。小鼠腹腔注射CCl4(carbon tetrachloride,四氯化碳)誘導(dǎo)化學(xué)性肝損傷模型。以肝臟切片H&E染色以及血清生化指標(biāo)考察AUR對(duì)CCl4所致小鼠化學(xué)性肝損傷的保護(hù)作用;在預(yù)防給藥情況下,測(cè)定膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)體Ntcp、Bsep、Mrp2的表達(dá)水平,評(píng)價(jià)AUR對(duì)肝內(nèi)膽汁酸水平的調(diào)節(jié)作用

10、;測(cè)定膽汁酸合成酶Cyp7a1、Cyp8b1及代謝酶Sult2a1的表達(dá)水平,評(píng)價(jià)AUR對(duì)膽汁酸合成及代謝的影響;以BrdU染色陽(yáng)性肝細(xì)胞數(shù)為指標(biāo),揭示AUR對(duì)肝修復(fù)的影響;測(cè)定FoxM1b、Cyclin D1和Cyclin B1的表達(dá)水平,進(jìn)一步揭示AUR促進(jìn)肝細(xì)胞增殖的分子機(jī)制;測(cè)定炎性相關(guān)因子NF-κB、TNF-α、IL-1β、MCP-1(monocyte chemotactic protein1,單核細(xì)胞趨化蛋白-1)的表達(dá),評(píng)

11、價(jià)AUR對(duì)CCl4所致炎性反應(yīng)的抗炎機(jī)制。體外實(shí)驗(yàn)采用小鼠原代肝細(xì)胞進(jìn)行FXR基因沉默實(shí)驗(yàn),考察AUR對(duì)FXR及相關(guān)靶基因作用的影響。
  結(jié)果:(1)在LCA所致小鼠膽汁淤積性肝損傷實(shí)驗(yàn)中,AUR作為FXR的激動(dòng)劑,通過(guò)下調(diào)Ntcp的表達(dá),上調(diào)Bsep和Mrp2的表達(dá),減少膽汁酸的攝取,促進(jìn)膽汁酸的外排;通過(guò)下調(diào)Cyp7a1和Cyp8b1的表達(dá),上調(diào)Sult2a1的表達(dá),減少膽汁酸合成,促進(jìn)膽汁酸的代謝;通過(guò)上調(diào)Cyclin D

12、1、Cyclin B1以及其上游調(diào)控基因FoxM1b的表達(dá),促進(jìn)肝細(xì)胞增殖;通過(guò)抑制炎癥相關(guān)因子的表達(dá)減輕肝臟的炎癥反應(yīng)。體內(nèi)和體外的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)一步證實(shí),AUR對(duì)LCA所致膽汁淤積性肝損傷的肝保護(hù)作用是由于激活FXR后對(duì)上述基因表達(dá)的調(diào)控。
  (2)在TAA所致小鼠肝纖維化實(shí)驗(yàn)中,AUR通過(guò)減少膽汁酸的攝取與合成,促進(jìn)膽汁酸的外排來(lái)降低小鼠體內(nèi)毒性膽汁酸水平;通過(guò)下調(diào)纖維化相關(guān)基因TGF-β1、α-SMA、TIMP和COL1-α

13、1的表達(dá),發(fā)揮減少膠原纖維沉積和抑制HSCs(hepatic stellate cells,肝臟星狀細(xì)胞)活化的作用;通過(guò)下調(diào)NF-κB、TNF-α、IL-1β和IL-6的表達(dá)發(fā)揮抗炎作用。AUR的上述調(diào)節(jié)作用被FXR拮抗劑GS所消除。體外基因沉默實(shí)驗(yàn)直接證明FXR參與AUR的抗TAA所致纖維化作用。
  (3)在CCl4所致小鼠化學(xué)性肝損傷的實(shí)驗(yàn)中,預(yù)防給予AUR通過(guò)下調(diào)Ntcp、Cyp7a1和Cyp8b1的表達(dá),減少膽汁酸的攝

14、取與合成;通過(guò)上調(diào)Bsep、Mrp2和Sult2a1的表達(dá),促進(jìn)膽汁酸的外排與代謝;通過(guò)上調(diào)FoxM1b以及Cyclin D1和Cyclin B1的表達(dá),促進(jìn)肝細(xì)胞增殖與再生;通過(guò)抑制炎性因子(NF-κB、TNF-α、IL-1β、MCP-1等)的表達(dá),減輕CCl4所引起的炎癥反應(yīng)。FXR基因沉默試驗(yàn)進(jìn)一步證明,AUR發(fā)揮上述肝臟保護(hù)作用的機(jī)制與FXR參與的基因調(diào)控密切相關(guān)。
  結(jié)論:AUR是一種新的FXR激動(dòng)劑。通過(guò)激活FXR,

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