加味白頭翁湯對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸粘膜損傷修復(fù)作用的機(jī)理研究.pdf

1、目的：
　　 潰瘍性結(jié)腸炎(UC)的病因和發(fā)病機(jī)制目前還不十分清楚。近年來(lái),隨著對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎研究的深入,人們對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病及治療有了新的認(rèn)識(shí),認(rèn)為不論是腸道的原發(fā)性病變,還是繼發(fā)性損害,均會(huì)造成結(jié)腸粘膜結(jié)構(gòu)和功能的損傷,腸粘膜損傷與潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病密切相關(guān)。腸粘膜不僅是營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化、吸收的重要場(chǎng)所,同時(shí)也是致病微生物和毒素侵入的主要門戶。生理情況下,機(jī)體可通過(guò)腸粘膜屏障來(lái)有效地阻止致病微生物和毒素的侵入,以保證機(jī)體處于健康

2、狀態(tài)。當(dāng)腸粘膜屏障損傷時(shí),腸道中的微生物和毒素便可突破腸粘膜屏障,進(jìn)入門靜脈和淋巴系統(tǒng)引起細(xì)菌移位,甚至發(fā)展為潰瘍性結(jié)腸炎。
　　 為明確炎性細(xì)胞調(diào)控因子NF-κB、β-防御素-2、TFF3、EGF及TGF-β1在腸道自我保護(hù)和損傷后修復(fù)機(jī)制中的重要地位,本課題采用高脂高糖飲食加上TNBS灌腸法復(fù)制濕熱型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型,在結(jié)腸粘膜損傷方面“尋本溯源”,把研究的重點(diǎn)放在炎性細(xì)胞調(diào)控因子NF-κ B及β-防御素-2上。在腸道修

3、復(fù)作用方面,則重點(diǎn)探討TFF3、EGF、TGF-β1在潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)生發(fā)展及粘膜修復(fù)過(guò)程中的變化及相關(guān)調(diào)節(jié)機(jī)制。通過(guò)觀察加味白頭翁湯對(duì)NF-κ B活化及β-防御素-2、TFF3、TGFβ1、EGF表達(dá)的影響,進(jìn)而探討加味白頭翁湯對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎腸道損傷修復(fù)的作用機(jī)理。從而為加味白頭翁湯應(yīng)用于潰瘍性結(jié)腸炎臨床提供理論基礎(chǔ),同時(shí)對(duì)中醫(yī)治則治法的現(xiàn)代化研究作有益探討。
　　 方法：
　　 將40只SPF級(jí)健康SD大鼠,雌雄各半,

4、隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、柳氮磺胺吡啶組、加味白頭翁湯組,每組10只。采用三硝基苯磺酸(TNBS)局部灌腸加高脂高糖法建立UC大鼠模型,動(dòng)物模型制作成功后,中藥治療組給予加味白頭翁湯灌胃,西藥對(duì)照組給予柳氮磺胺吡啶(SASP)灌胃,模型組及正常對(duì)照組給予等容積的生理鹽水灌胃,每天1次,連用15d。治療結(jié)束后將大鼠固定于鼠解剖臺(tái)上,腹腔注射20％氨基甲酸乙酯麻醉,剖取整個(gè)結(jié)腸組織,先行肉眼仔細(xì)觀察各組大鼠結(jié)腸粘膜的充血、水腫、偽膜、潰瘍

5、和糜爛數(shù)目及面積病理改變情況,然后再取少量結(jié)腸粘膜組織石蠟包埋,HE染色,光鏡觀察大鼠結(jié)腸組織病理形態(tài)學(xué)變化。剩余結(jié)腸粘膜標(biāo)本運(yùn)用蛋白免疫印跡(Westem blot),法檢測(cè)NF-κB的蛋白表達(dá)水平,用:Real-time PCR方法測(cè)定β-防御素-2、TFF3的基因表達(dá)變化,免疫組化法觀察TGFβ1、EGF蛋白表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果：
　　 1、加味白頭翁湯方組與模型組相比較:大鼠的一般情況明顯好轉(zhuǎn),大鼠膿血便和粘

6、液便消失,大便成形,活動(dòng)靈活,食欲好轉(zhuǎn),大鼠體重明顯增高。加味白頭翁湯方可使結(jié)腸粘膜組織損傷和病理組織學(xué)評(píng)分降低,與模型組比較,差異顯著(P＜0.01)。結(jié)腸粘膜組織的充血、水腫、偽膜、潰瘍和糜爛數(shù)目及面積減少,腸壁損傷修復(fù),炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減少,潰瘍附近腸粘膜可見不連續(xù)粘液層覆蓋,而粘膜下層則可見膠原纖維增生。
　　 2、與正常組比較,模型組大鼠NF-KB p65表達(dá)顯著增高,差異顯著(P＜0.01);給予加味白頭翁湯治療后,NF

7、-KB p65表達(dá)明顯下降,與模型組比較,差異顯著(P＜0.01);中藥治療組與西藥對(duì)照組比較無(wú)顯著差異(P＞0.05)。
　　 3、與正常組比較,模型組大鼠結(jié)腸粘膜β-防御素-2表達(dá)顯著增高,差異顯著(P＜0.01);給予加味白頭翁湯治療后,結(jié)腸粘膜β-防御素-2基因表達(dá)明顯下降,與模型組比較,差異顯著(P＜0.01),中藥治療組與西藥對(duì)照組比較無(wú)顯著差異(P＞0.05)。
　　 4、與正常組比較,模型組大鼠結(jié)腸粘膜T

8、FF3略有降低,但沒(méi)有顯著差異(P＞0.05);給予加味白頭翁湯治療后,結(jié)腸粘膜TFF3基因表達(dá)明顯上升,與模型組比較,差異顯著(P＜0.01);中藥治療組與西藥對(duì)照組比較無(wú)顯著差異(P＞0.05)。
　　 5、與正常組比較,模型組TGFβ1的表達(dá)明顯增高,兩組比較差異顯著(P＜0.01),給予加味白頭翁湯治療后,TGFβ1相對(duì)表達(dá)明顯下降,與模型組比較,差異顯著(P＜0.01),中藥治療組與西藥對(duì)照組比較無(wú)顯著差異(P＞0.0

9、5)。與正常組比較,模型組EGF的表達(dá)明顯低于正常組,兩組比較差異顯著(P＜0.01);給予加味白頭翁湯治療后,EGF蛋白相對(duì)表達(dá)明顯增高,與模型組比較,差異顯著(P＜0.01),中藥治療組與西藥對(duì)照組比較無(wú)顯著差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、加味白頭翁湯方可抑制UC的炎性細(xì)胞浸潤(rùn),使炎癥減輕,同時(shí)還有促進(jìn)結(jié)腸粘膜損傷修復(fù),恢復(fù)結(jié)腸粘膜的分泌功能的作用。說(shuō)明本課題UC模型復(fù)制成功。加味白頭翁湯方可通過(guò)減輕

10、結(jié)腸炎癥,促進(jìn)結(jié)腸粘膜修復(fù),從而起到治療UC的作用。
　　 2、 NF-KB p65的表達(dá)與UC病情嚴(yán)重性和活動(dòng)性之間有一定關(guān)系,提示UC結(jié)腸粘膜組織的NF-KB表達(dá)水平可反映結(jié)腸組織的損害程度,對(duì)于病情評(píng)估和治療效果判斷可能具有潛在指導(dǎo)意義。加味白頭翁湯組對(duì)UC大鼠模型過(guò)度激活的NF-KB有抑制作用,這可能是加味白頭翁湯組治療UC大鼠的作用機(jī)理之一。
　　 3、加味白頭翁湯方的治療作用可能在于通過(guò)下調(diào)β-防御素-2基因

11、表達(dá)含量,進(jìn)而減輕結(jié)腸粘膜的炎癥反應(yīng),殺傷腸道病原微生物,起到粘膜修復(fù)的作用。β-防御素-2可能是加味白頭翁湯治療UC作用的關(guān)鍵的靶位。
　　 4、加味白頭翁湯方可通過(guò)增加結(jié)腸上皮細(xì)胞TFF3的分泌從而促進(jìn)受損結(jié)腸粘膜組織的修復(fù)。
　　 5、加味白頭翁湯對(duì)UC大鼠模型結(jié)腸粘膜TGFβ1蛋白表達(dá)有下調(diào)作用,從而抑制炎癥的發(fā)生發(fā)展;對(duì)UC大鼠EGF的蛋白表達(dá)則有上調(diào)作用,能夠促進(jìn)受損粘膜周圍的完好上皮細(xì)胞向損傷粘膜表面遷移覆