一個擬南芥花器官發(fā)育突變體的遺傳分析和基因定位.pdf

1、模式植物擬南芥在植物基因組研究中起重要作用。對擬南芥突變體的鑒定和相關(guān)基因的功能分析是擬南芥功能基因組研究的重要內(nèi)容。本研究旨在對本實驗室新近獲得的一個擬南芥花器官發(fā)育突變體進(jìn)行詳細(xì)的遺傳分析,并利用圖位克隆法分離控制突變性狀的基因。
　　 本實驗所研究的突變體3—34來自擬南芥T—DNA插入突變體系NH(哥倫比亞生態(tài)型)的分離后代。該突變體在植株生長發(fā)育過程中表現(xiàn)明顯的突變性狀:主莖較細(xì)且短小,有的甚至不能抽薹；葉片顏色較深,

2、苔莖葉細(xì)長或扭曲；花蕾簇生、較多且多數(shù)發(fā)育不完全；花瓣數(shù)目為兩瓣、三瓣、四瓣和五瓣不等,部分花有雌蕊缺失現(xiàn)象。在T—DNA載體(pBI121)上,35S上下游區(qū)域共設(shè)計引物四對引物35s-3/YM14、35s-3/FsaL、CTF/CTR和GFPR/GFPF,來檢測載體序列,但PCR結(jié)果均表現(xiàn)為陰性即沒有檢測到T—DNA插入。
　　 以Ler-WT為母本,3—34突變體為父本構(gòu)建了有1200個單株的F2代分離群體。表型分析發(fā)現(xiàn)該

3、群體有234個突變株,符合單基因隱性突變的遺傳模式。本實驗首先用BSA法對平均分布于擬南芥5條染色體上的22個InDel標(biāo)記進(jìn)行篩選,發(fā)現(xiàn)只有位于第五條染色體上的最后一個標(biāo)記ciw10在兩個Bulked池之間出現(xiàn)多態(tài)性,即說明ciw10與目標(biāo)基因連鎖。然后在ciw10上下游共開發(fā)了17個InDel標(biāo)記,用42個正常表型和52個突變表型組成的F2群體進(jìn)行篩選,將目標(biāo)基因定位于MR11和ciw10之間。用同樣的方法又開發(fā)了18個InDel標(biāo)