格氏栲居群遺傳多樣性研究.pdf

1、格氏栲屬國(guó)家重點(diǎn)保護(hù)植物，是特產(chǎn)于我國(guó)中亞熱帶地區(qū)南緣的第三紀(jì)孑遺植物，由于人為破壞、自身生物學(xué)特性及自然環(huán)境等因素的綜合作用，格氏栲資源已趨于枯竭。生物學(xué)因素是影響格氏栲種群瀕危的主要因素之一，其中遺傳結(jié)構(gòu)、演化過程與物種瀕危有著密切關(guān)系。為此，筆者首次應(yīng)用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)不同地理分布的格氏栲居群進(jìn)行遺傳多樣性分析，主要研究結(jié)果：
　　 （1）利用改良的CTAB方法從格氏栲葉片中提取的DNA，產(chǎn)量高、質(zhì)量好，均能滿足IS

2、SR分析要求；
　　 （2）對(duì)格氏栲ISSR-PCR反應(yīng)體系進(jìn)行優(yōu)化，篩選出適合格氏栲的反應(yīng)最佳體系，其擴(kuò)增譜帶清晰、多態(tài)性強(qiáng)，穩(wěn)定性好。也參考一般ISSR分析反應(yīng)程序，通過正交試驗(yàn)，確定適合格氏栲ISSR-PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性 5 min；94℃變性30s；52℃退火 45 s；72℃延伸 1.5 min，變性ó延伸，循環(huán)34次；最后72℃延伸 10min。PCR擴(kuò)增的體系（總體積20μL）為：模板DNA 20ng，

3、dNTP 0.10mmol/L，10×PCR Buffer 2.0μL，引物0.2 μmol/L，Taq酶0.75 U，ddH2O11.3 μL，MgCl22.0mM；
　　 （3）格氏栲居群遺傳多樣性ISSR分析。采用10條ISSR引物對(duì)74份不重復(fù)的格氏栲個(gè)體樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增，每條引物均能產(chǎn)生清晰條帶，共擴(kuò)增出113條帶，其中98條為多態(tài)性帶，多態(tài)性比率為86.73％，較高的多態(tài)性表明格氏栲在物種水平上具有豐富的遺傳多樣性

4、。借助SPSS13.0軟件分析ISSR表型數(shù)據(jù)矩陣，計(jì)算各樣品間的相似系數(shù)，建立親緣關(guān)系聚類樹狀圖，并以GD=0.19為界，結(jié)合聚類分析圖，可將74份格氏栲種質(zhì)分為三大類：第一類群包括了43份材料，主要為南平、三明和江西居群；第二類群包括了8份材料，以龍巖和建寧居群為主；第三類群包括了23份材料，主要為廣東和廣西居群?？梢姼袷翔嗑尤洪g分子系統(tǒng)格局與其地理空間格局基本一致，存在顯著正相關(guān)。由于地理距離接近，氣候類型相似，基因交流可能性較大

5、，因而遺傳距離較?。环粗乩砭嚯x較遠(yuǎn)，生態(tài)因子變化較大，格氏栲自然選擇的壓力則不同，在進(jìn)化中形成了較大的遺傳距離。聚類分析結(jié)果與地理自然分布規(guī)律基本一致，可結(jié)合野外種群調(diào)查與分子標(biāo)記技術(shù)來評(píng)價(jià)格氏栲資源遺傳多樣性，進(jìn)一步探討格氏栲種群的親緣地理學(xué)與遺傳結(jié)構(gòu)的時(shí)空變化規(guī)律。
　　 （4）POPGENE分析結(jié)果表明，格氏栲居群具有豐富的遺傳多樣水平（多態(tài)百分率 PPB=86.73％，Nei’s基因多樣度H=0.2791，Shanno

6、n’s信息指數(shù)I=0.4246）?？偟倪z傳變異中有46.23％存在于居群間，居群內(nèi)的遺傳變異為53.77％，表明格氏栲居群間和居群內(nèi)都存在比較顯著的遺傳分化。UPGMA聚類分析反映出格氏栲種群遺傳距離與地理距離存在正相關(guān)性。依據(jù)格氏栲種群遺傳學(xué)和生態(tài)學(xué)的研究結(jié)果，提出應(yīng)加大對(duì)遺傳多樣性高的格氏栲種群保護(hù)力度，加強(qiáng)對(duì)各種群內(nèi)的個(gè)體進(jìn)行相互移栽和采種育苗移栽，促進(jìn)種群間的基因流動(dòng)，使各種群遺傳多樣性保持平衡，以最大限度地保存格氏栲資源的遺傳