昆明山海棠有效成分提取方法優(yōu)化和HPLC指紋圖譜的研究.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?br>　　 昆明山海棠[Tripterygium Hypoglaucum(Levl.)Hutch，THH]為衛(wèi)矛科雷公藤屬植物，是一種民間傳統(tǒng)中藥，具有消炎、解毒、祛風(fēng)濕等作用。臨床用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、慢性。腎炎和各種皮膚病。昆明山海棠具有良好的藥理作用，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)其生藥學(xué)、化學(xué)成分、藥理作用、臨床應(yīng)用等方面進(jìn)行了較多的研究和報(bào)道。該中藥片劑收載于2005年版《中華人民共和國(guó)藥典》。昆明山海棠制劑雖然應(yīng)用多年，但總體說仍

2、然缺少有效質(zhì)量控制手段；加之產(chǎn)地的不同，其有效成分含量差異較大，為了進(jìn)一步研究并完善其質(zhì)量控制技術(shù)方法，本文以昆明山海棠中有效成分雷公藤甲素為指標(biāo)，對(duì)昆明山海棠藥材有效成分的提取方法和含量測(cè)定進(jìn)行了研究，并對(duì)11個(gè)不同產(chǎn)地昆明山海棠藥材中雷公藤甲素含量進(jìn)行了分析，同時(shí)對(duì)不同產(chǎn)地昆明山海棠高效液相指紋圖譜進(jìn)行了分析。
　　 內(nèi)容及方法：
　　 1.應(yīng)用RP-HPLC法，建立了雷公藤甲素標(biāo)準(zhǔn)品的測(cè)定方法；
　　 2.

3、以熱提取法為基礎(chǔ)，以雷公藤甲素為標(biāo)準(zhǔn)，采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)對(duì)昆明山海棠中的主要有效成分提取方法進(jìn)行了優(yōu)化；
　　 3.應(yīng)用反相高效液相色譜法(RP-HPLC)測(cè)定了不同產(chǎn)地昆明山海棠中雷公藤甲素的含量；
　　 4.分析了不同產(chǎn)地的昆明山海棠藥材高效液相指紋圖譜，利用中藥指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)軟件分析了昆明山海棠特征指紋圖譜及不同產(chǎn)地昆明山海棠的差異。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　 1.建立了昆明山海棠中有效

4、成分雷公藤甲素的測(cè)定方法，并以雷公藤甲素為標(biāo)志，對(duì)THH的提取方法進(jìn)行了優(yōu)化，通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交試驗(yàn)，確定其最佳提取條件為：乙酸乙酯作為提取溶劑，熱提取時(shí)間5h，溫度75℃，固液比為1:10。
　　 2.對(duì)云南不同產(chǎn)地的11個(gè)昆明山海棠藥材樣品中的雷公藤甲素的含量進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果表明不同產(chǎn)地THH根部雷公藤甲素的含量差異較大，玉溪元江縣和昆明祿勸縣產(chǎn)THH根部雷公藤甲素的含量較高，而昆明尋甸縣、曲靖馬龍縣產(chǎn)THH根部雷公藤甲素

5、含量較低，相差達(dá)4倍左右。這說明測(cè)定THH中有效成分作為其藥材質(zhì)量的標(biāo)志具有重要意義，也為制訂科學(xué)的昆明山海棠制劑質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供了數(shù)據(jù)。
　　 3.建立了昆明山海棠藥材高效液相指紋圖譜方法：甲醇為提取溶劑，回流提取，過濾后直接進(jìn)樣；采用甲醇-乙腈-水梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)210nm。通過對(duì)方法學(xué)穩(wěn)定性、重復(fù)性和精確度分析，均表明相關(guān)條件適宜于昆明山海棠藥材高效液相指紋圖譜的分析。
　　 4.初步建立了11個(gè)不同產(chǎn)地昆明山海

6、棠藥材指紋圖譜，發(fā)現(xiàn)有10個(gè)峰是共有的，確定為共有特征峰；10個(gè)共有特征峰峰面積總和大于90％，可以作為THH藥材鑒定的標(biāo)志峰。通過對(duì)指紋圖譜中峰的位置、保留時(shí)間、峰面積、整體圖貌等特征對(duì)譜圖進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)9個(gè)產(chǎn)地的昆明山海棠藥材相似度達(dá)到0.9以上，但大理漾濞、大理賓川產(chǎn)的昆明山海棠藥材相似度僅為0.651、0.527，存在著較大差異；此外，不同產(chǎn)地各成分含量差異較大，提示其藥效、毒性等方面可能存在較大差異。相關(guān)指紋圖譜的研究數(shù)據(jù)，為

7、THH藥材鑒定、藥效的評(píng)估等質(zhì)量控制提供了數(shù)據(jù)。
　　 結(jié)論：
　　 1.建立了的雷公藤甲素RP-HPLC檢測(cè)方法，總體操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，靈敏度高，重復(fù)性好，可用于昆明山海棠片中雷公藤甲素的含量測(cè)定。
　　 2.優(yōu)化了THH有效成分提取實(shí)驗(yàn)方法，以雷公藤甲素為標(biāo)準(zhǔn)，其最佳提取條件為：乙酸乙酯作為提取溶劑，熱提取時(shí)間5h，溫度75℃，固液比為1:10。
　　 3.測(cè)定了不同產(chǎn)地THH根部雷公藤甲素的含量，不同