食品中羅丹明B免疫快速檢測技術的研究及應用.pdf

1、羅丹明B（Rhodamine B，RB），俗稱花粉紅，是一種具有鮮桃紅色的人工合成的化工染料，具有致癌致突變作用。因具有價格低廉、色澤紅艷、穩(wěn)定性強等特點，常被不法分子用作辣椒粉、辣椒油及臘腸等調味品的染色劑，給人們的健康乃至社會帶來了極大的危害，因此研究食品中羅丹明B的檢測方法是迫切需要的。然而目前，檢測食品中RB方面的文獻至今未見報道，雖然RB被列為衛(wèi)生部首批公布的17種違禁食品添加物質之一，但仍有違規(guī)應用。因此研究RB的快速檢測與

2、鑒定方法具有重大意義。
　　本文通過采用RB的同系物羅丹明123（Rhodamine123，R123）合成人工抗原，制備針對RB的多克隆抗體，初步建立了檢測RB的間接競爭酶聯免疫吸附法（ELISA）和膠體金免疫層析分析法，兩種方法都具有良好的特異性和靈敏度。利用戊二醛法將R123分別與牛血清白蛋白( bovine serμm albμmin,BSA)和卵清白蛋白( ovalbμmin,OVA)進行偶聯，制備出完全免疫抗原R123-

3、BSA和包被抗原R123-OVA。將免疫原R123-BSA與弗氏佐劑等體積混勻后，采用皮下多點免疫3月齡的新西蘭大耳白兔，制備RB的多克隆抗血清。多次免疫后，經測定兔子產生的抗血清效價為1：4000，采用硫酸銨鹽析沉淀法純化制得的兔抗血清，得到特異性的RB多克隆抗體。以純化的抗體為基礎，建立了RB的間接競爭酶聯免疫吸附法。實驗表明，在0.001ng/ml～10000ng/ml范圍內，IC50為3.96ng/ml，IC15達到了0.23

4、ng/ml，對羅丹明6G、蘇丹紅和胭脂紅的交叉反應率分別為55.93％、8.82%和0.51%，表明此方法具有較高的特異性，并對方法的精密度、靈敏度等進行了評價。在樣品的實際檢測中，分別對枸杞、辣椒、花椒進行了檢測，消除了基質影響，樣品回收率測定為80.50%-110.50%，并通過高壓液相色譜法（HPLC）對所建立的ELISA方法進行了比較和驗證，兩種方法均呈現出良好的線性關系，相關系數R2為0.9695。結果表明，所建立的間接競爭E

5、LISA方法各項參數均能滿足實際檢測的需要，適合于食品中RB的免疫快速檢測。建立了以膠體金標記抗體為基礎的RB免疫快速檢測技術，以膠體金作為示蹤標記物，以硝酸纖維素膜（NC膜）為固相載體，包被R123-OVA作為檢測帶，包被羊抗兔IgG作為質控帶，通過優(yōu)化實驗條件，開發(fā)了滲濾式膠體金免疫快速檢測試紙條，并研制出RB標準品濃度比色卡，RB檢測范圍為0.01 ng/ml~20 ng/ml，其最低檢出限為0.5 ng/ml。對實際樣品的檢測，