釀酒酵母結(jié)合纖維小體與寡糖代謝單步轉(zhuǎn)化纖維素乙醇的研究.pdf

1、聯(lián)合生物加工過(guò)程是一種將酶表達(dá)、纖維素糖化、乙醇發(fā)酵在一個(gè)反應(yīng)器中進(jìn)行的高度集成生物煉制過(guò)程，但并沒(méi)有天然微生物可以適用于此過(guò)程直接進(jìn)行纖維素乙醇發(fā)酵。本文利用基因重組技術(shù)，在釀酒酵母細(xì)胞表面展示包含內(nèi)切葡聚糖酶和外切葡聚糖酶的雙支架微型纖維小體，同時(shí)在胞內(nèi)異源表達(dá)包含纖維糊精轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和β-葡萄糖苷酶的纖維糊精代謝途徑，使得重組釀酒酵母可以降解利用纖維素并與半乳糖進(jìn)行混糖發(fā)酵，該降解機(jī)制模擬了熱纖梭菌利用纖維素的模式。
　　1、在

2、釀酒酵母中異源表達(dá)纖維糊精代謝途徑、優(yōu)化篩選β-葡萄糖苷酶，并對(duì)纖維糊精轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白與β-葡萄糖菅酶進(jìn)行定位表征。
　　2、N-端分泌信號(hào)肽α-factor可以促進(jìn)綠色熒光蛋白GFP與表面展示的Ⅱ型支架形成復(fù)合體，并提高釀酒酵母細(xì)胞表面展示量～30％。
　　3、利用重組釀酒酵母表面展示纖維小體，篩選出針對(duì)不同纖維素乙醇產(chǎn)量較高的三種內(nèi)切葡聚糖酶和外切葡聚糖酶組合:Eng Y-cbhB、celCCA-CA_ C0911、celCC