富油淡水微藻的分離、鑒定與培養(yǎng)條件優(yōu)化.pdf

1、生物柴油是一種綠色可持續(xù)的新能源，微藻是生產(chǎn)生物柴油的重要原料之一，具備生長(zhǎng)速度快、富含油脂、不與人爭(zhēng)糧爭(zhēng)地及環(huán)保優(yōu)勢(shì)強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，因此以微藻為原料生產(chǎn)生物柴油具有潛在的優(yōu)勢(shì)。實(shí)現(xiàn)微藻生物柴油制備技術(shù)的首要和關(guān)鍵環(huán)節(jié)是高含油微藻藻株的篩選。為了獲得性能優(yōu)越的富油藻株，主要研究結(jié)果如下:
　　1.自南京市采集了16個(gè)水樣樣品和10個(gè)土壤樣品，采用稀釋涂布平板法分離、純化，獲得130株自然藻株。
　　2.以實(shí)驗(yàn)室保存藻株Chlore

2、lla sorokiniana Ls-2為對(duì)照，通過(guò)測(cè)定OD680篩選上述130株藻株中生長(zhǎng)速度快、細(xì)胞密度高的藻株，共獲得32株。隨后以生物量及油脂產(chǎn)量為復(fù)篩指標(biāo)，獲得2株生物量和產(chǎn)油量較高的藻株Wt5-6和W9-2，對(duì)應(yīng)的生物量分別為1.2 g/L和1.4 g/L，油脂產(chǎn)量分別為0.2 g/L和0.238 g/L。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，W9-2為自養(yǎng)生長(zhǎng)藻種，而Wt5-6可以葡萄糖為有機(jī)碳源進(jìn)行異養(yǎng)生長(zhǎng)。
　　3.通過(guò)形態(tài)觀察對(duì)復(fù)篩

3、的兩株藻株Wt5-6和W9-2進(jìn)行初步鑒定，結(jié)果顯示兩株藻株都呈球狀，隨后擴(kuò)增這兩株藻的18S rDNA序列，并進(jìn)行Blastn比對(duì)。結(jié)果顯示W(wǎng)t5-6與凱氏擬小球藻Parachlorella kessleri(SAG211-11C)，W9-2與小球藻屬Chlorella sorokiniana(AB080307.1)的序列一致性均為100％，因此將這兩株藻分別命名為Parachlorella kessleri Wt5-6和Chlore

4、lla sorokiniana W9-2。
　　4.為了進(jìn)一步提高優(yōu)勢(shì)藻種的生物量和油脂積累能力，首先嘗試?yán)没瘜W(xué)調(diào)控提高自養(yǎng)生長(zhǎng)藻株Chlorella sorokiniana W9-2的生物量和油脂合成的可能性。將C.sorokiniana W9-2分別接種到添加甘油、α-萘乙酸(NAA)及二甲亞砜(DMSO)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，結(jié)果表明，甘油處理會(huì)提高小球藻W9-2的生物量和油脂產(chǎn)量，甘油濃度為10 mL/L時(shí)，生物量最大，為2.

5、91 g/L，較對(duì)照生物量增加了127.34％，此時(shí)油脂產(chǎn)量同時(shí)達(dá)到最大，為0.29 g/L，較對(duì)照油脂產(chǎn)量提高了35.9％; NAA處理亦會(huì)提高小球藻W9-2生物量和油脂產(chǎn)量，NAA濃度為2 mg/L，其生物量達(dá)到最大，為2.26 g/L，較對(duì)照提高了82.25％，此時(shí)油脂產(chǎn)量為0.25 g/L，較對(duì)照提高了17.07％;DMSO抑制小球藻W9-2的生長(zhǎng)和油脂的積累。
　　5.嘗試對(duì)可異養(yǎng)生長(zhǎng)凱氏擬小球藻Parachlorell

6、a kessleri Wt5-6進(jìn)行異養(yǎng)培養(yǎng)條件的優(yōu)化，期望微藻生物量和油脂產(chǎn)量有較大的提升。單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該藻株異養(yǎng)生長(zhǎng)的最適碳源為葡萄糖、最適氮源為酵母粉;采用響應(yīng)面設(shè)計(jì)優(yōu)化培養(yǎng)基中的碳、氮源，結(jié)果為添加86.73 g/L的葡萄糖和11.97 g/L酵母粉時(shí)，凱氏擬小球藻Wt5-6可獲得最大生物量和油脂含量，分別對(duì)應(yīng)為39.01g/L和12.03 g/L，生物量和油脂含量較自養(yǎng)分別增加29倍和60倍;通過(guò)GC分析，該藻油中主要脂