萊茵衣藻高產(chǎn)油脂藻株的誘變篩選及其油脂代謝關(guān)鍵酶基因的轉(zhuǎn)錄分析.pdf

1、面對日益枯竭的化石能源和嚴(yán)重惡化的生態(tài)環(huán)境，生物柴油作為一種新型可再生的清潔能源，引起世界各國的關(guān)注。微藻能進(jìn)行光合作用，生長速度快、油脂含量高、且培養(yǎng)占用耕地，被認(rèn)為是最具潛力的油脂生物能源。但是生產(chǎn)成本較高，微藻能源至今未突破產(chǎn)業(yè)化這個瓶頸。本研究旨在通過誘變選育的方法獲得生長速度快且油脂含量高的微藻，并對其油脂代謝關(guān)鍵酶基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄分析，探究其油脂含量增加的可能原因和途徑，以期為微藻生物柴油高產(chǎn)油脂藻種的選育及在生產(chǎn)實踐中應(yīng)用基因

2、工程手段進(jìn)行藻株的改造提供數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。
　　本實驗首先確定了紫外線照射時間（20s，25s）與喹禾靈篩選濃度（5.5，6.0μmol/L），采用紫外線誘變與喹禾靈脅迫相結(jié)合的方法對萊茵衣藻CC-124進(jìn)行定向選育。通過測定生長速率初篩出5株生長速度較快的突變藻株，用尼羅紅染色對限氮培養(yǎng)第4天的藻細(xì)胞油脂進(jìn)行觀察，挑選出了2株油脂顆粒大且數(shù)目多的突變藻株：4-2-2和9-2-7。采用酸解法測定了出發(fā)株和突變株限氮培養(yǎng)第0、4、6天時中

3、性脂的含量，2個突變藻株都表現(xiàn)出高于出發(fā)藻株的中性脂水平。
　　利用GeNorm、BestKeeper和NormFinder三個內(nèi)參基因篩選軟件從18SrRNA、COX4、COX12、actin這四個候選內(nèi)參基因中選出表達(dá)最穩(wěn)定的COX12作為最適內(nèi)參基因，對出發(fā)藻株、突變藻株4-2-2和9-2-7在限氮培養(yǎng)0、2、4、6天時4個微藻油脂代謝關(guān)鍵酶基因的轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行了實時熒光定量PCR檢測。這4個酶分別為乙酰輔酶A羧化酶（ACCa