基于分子信標及鏈置換分子機器技術的生物傳感器的制備.pdf

1、腫瘤細胞作為一類非正常增殖細胞，嚴重威脅到人類生命健康，因此早期的預防與診斷對于患者的康復具有有重要的意義。近年來，腫瘤標志物和腫瘤細胞實現準確而靈敏的檢測成為人們研究的熱點。本論文主要研究了基于分子信標及分子機器的新型生物傳感器，并結合鏈置換反應放大技術、磁性分離技術和室溫下分子信標放大技術將此傳感器應用在腫瘤標志物端粒酶的分析檢測當中，取得了較理想的結果。本論文的主要內容包括以下三個部分：
　　1.本體系基于分子信標技術和鏈置

2、換反應信號放大的特性，設計了一種新穎的DNA生物傳感器，實現了對端粒酶的特異性高靈敏檢測。分子機器鏈置換信號放大技術結合莖環(huán)熒光探針組成了熒光信號的雙循環(huán)放大結構。實驗中分子機器信號放大過程可以自動運行，并實現信號的指數性放大。它是采用Ts前體與端粒酶作用驅動反應的進行，多次鏈置換反應置換出信號DNA，實現信號DNA的指數性富集放大。在這里我們采用莖環(huán)結構作為熒光信號的攜帶者和雙循環(huán)放大的檢測主體，鏈置換反應信號放大過程富集的信號DNA

3、鏈與莖環(huán)結構互補，莖環(huán)結構打開為雙鏈DNA，在切割內切酶作用下，特異性識別剪斷與信號DNA鏈互補的莖環(huán)熒光探針，信號DNA與熒光探針片段解旋，熒光基團與淬滅基團分離，熒光信號從而增強，分離出的信號DNA再次結合莖環(huán)熒光探針實現信號的循環(huán)放大，最終構建出一種高靈敏度檢測端粒酶的生物傳感器。在優(yōu)化的條件下最低可以檢測到端粒酶的濃度為2.5×10-14gmL-1。同時由于端粒酶具有特異性催化的特性，該體系對靶分子具有良好的選擇性，其他類型的酶

4、對端粒酶的檢測干擾很小，故該體系為臨床醫(yī)學和生物分析提供了一種新的分析方法。
　　2.本體系研究了影響金納米粒子淬滅熒光素的一些因素，并基于ATP與ATP適體特異性結合的原理，結合金納米粒子對近距離熒光基團的淬滅作用，設計了檢測ATP的新型生物傳感器。在優(yōu)化的實驗條件下最低可以檢測到6×10-7 g mL-1濃度的ATP含量，為實現快速、特異性檢測ATP含量開創(chuàng)了新的理論依據和實驗路徑。
　　3.Luminol-H2O2-C