LB膜模擬離子交換層析界面研究食用膠原蛋白肽吸附作用.pdf

1、食用膠原蛋白肽是近年來(lái)發(fā)展較快的一種食用性保健蛋白。它主要從海洋動(dòng)物或者海洋動(dòng)物的加工廢料（魚皮，魚鱗）中提取，經(jīng)過(guò)分離純化以及干燥加工后制得成品即可食用。其中，膠原蛋白分離純化的重要方法為離子交換層析法。但是由于用于分離純化蛋白的離子交換介質(zhì)具有宏觀性強(qiáng)、構(gòu)象復(fù)雜以及蛋白分子尺寸較小、荷電數(shù)不均一等特點(diǎn)，很難從微觀層面研究純化過(guò)程中離子交換介質(zhì)與膠原蛋白肽之間的相互作用。本論文制備了二乙氨乙基（DEAE）瓊脂糖，利用LB膜技術(shù)將其制備

2、成單分子膜，作為離子交換層析介質(zhì)的模擬界面，采用垂直提拉法轉(zhuǎn)移到石英晶體微天平（QCM）芯片上，研究膠原蛋白肽在離子交換層析界面上的吸附作用。
　?。?）基于LB膜技術(shù)，研究了具DEAE瓊脂糖結(jié)構(gòu)的LB膜制備方法。DEAE瓊脂糖是一般膠原蛋白肽純化過(guò)程中所使用的離子層析交換介質(zhì)。利用LB膜技術(shù)制備了DEAE瓊脂糖單分子層，分析其表面壓（π）-面積（A）曲線，崩潰壓較高，成膜過(guò)程明顯。研究濃度對(duì)DEAE瓊脂糖成膜情況的影響，確定最佳

3、成膜濃度為0.5 mg/mL。考察配基密度與表面電勢(shì)的關(guān)系，其表面電勢(shì)隨著配基密度的增加而增大。采用原子力顯微鏡（AFM）和布魯斯特角顯微鏡（BAM）對(duì)制備的LB膜進(jìn)行了表征，得出表面膜的表面平整、緊密，厚度約為7.9 nm，表面粗糙度為2 nm。由此說(shuō)明，DEAE瓊脂糖可被制備成LB膜并成功轉(zhuǎn)移到硅片上。將其用于模擬DEAE瓊脂糖離子交換層析界面，研究微觀層面上膠原蛋白肽或者其他蛋白質(zhì)與離子層析交換介質(zhì)的相互作用，具有一定的理論價(jià)值以

4、及實(shí)際意義。
　?。?）利用DEAE瓊脂糖LB膜模擬離子層析交換界面，采用石英晶體微天平分析膠原蛋白肽在模擬界面上的吸附量。研究?jī)?nèi)容分膠原蛋白肽分子量和DEAE瓊脂糖層析介質(zhì)配基密度兩個(gè)方面。在同一離子層析交換介質(zhì)配基密度情況下，選取500 Da、1000 Da、3000 Da、5000 Da四種分子量的膠原蛋白肽。結(jié)果表明，膠原蛋白肽的吸附量隨分子量的增加而增加。在同一分子量情況下，配基密度選取6 mmol/L、16 mmol/