基于DNA酶增敏的微流控化學(xué)發(fā)光法在生物分析中的應(yīng)用研究.pdf

1、功能核酸（適配體、核酶、脫氧核酶和適配體核酶）因其特異性的配體結(jié)合能力和多效的催化活性，近年來備受研究人員的關(guān)注。富含鳥嘌呤的寡核苷酸在某些離子的誘導(dǎo)下可發(fā)生結(jié)構(gòu)變化，折疊形成G-四聯(lián)體，再進(jìn)一步結(jié)合血紅素，可形成DNA酶。DNA酶是一種具有辣根過氧化物酶活性的功能核酸。
　　微流控順序注射法精度高、重現(xiàn)性好、試劑消耗量少、檢測(cè)通量高，化學(xué)發(fā)光法靈敏度高、無需外加光源、線性范圍寬，將微流控順序注射和化學(xué)發(fā)光法聯(lián)用能兼具二者優(yōu)點(diǎn)，整

2、套實(shí)驗(yàn)裝置高效低耗、易于微型化，在生化分析領(lǐng)域的應(yīng)用前景明確。
　　本論文共分兩章:
　　第一章為緒論部分，著重綜述了三類功能核酸及各自的主要作用。介紹了由鉀離子誘導(dǎo)形成的DNA酶的構(gòu)成、功能，基于DNA酶增敏檢測(cè)鉀離子的方法，以及基于DNA酶擴(kuò)增的信號(hào)放大技術(shù)。同時(shí)，對(duì)微流控順序注射-化學(xué)發(fā)光法的聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行了綜述。
　　第二章，開展基于DNA酶增敏的微流控化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行生物分析的研究。
　　首先研究了DNA酶

3、的合成，通過鉀離子誘導(dǎo)富含鳥嘌呤的特定寡核苷酸形成G-四聯(lián)體，然后結(jié)合血紅素形成DNA酶;進(jìn)而研究利用該DNA酶的催化活性，構(gòu)建微量鉀離子的化學(xué)發(fā)光分析法，成功應(yīng)用于真實(shí)人體血清中的鉀離子含量分析。在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研究基于目標(biāo)分子觸發(fā)的雜交鏈反應(yīng)(HCR)擴(kuò)增技術(shù)，在目標(biāo)分子總量不變的前提下，通過自組裝擴(kuò)增DNA酶，大大提高了檢測(cè)靈敏度，并探索應(yīng)用于阿爾茲海默病基因診斷相關(guān)的單核苷酸多態(tài)性研究。
　　實(shí)驗(yàn)中，通過紫外可見光譜證明

4、了G-四聯(lián)體/血紅素復(fù)合物的形成，優(yōu)化了DNA酶的孵育條件;根據(jù)DNA酶的催化活性，挑選出了檢測(cè)鉀離子的寡核苷酸--AGRO100，進(jìn)而優(yōu)化了DNA酶催化化學(xué)發(fā)光的反應(yīng)條件，發(fā)現(xiàn)儲(chǔ)存于低溫條件下的DNA酶具有較好的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性和長(zhǎng)期的過氧化物酶催化活性。將該酶應(yīng)用于人體血清中鉀離子的檢測(cè)，通過配對(duì)t檢驗(yàn)進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)所建立的基于DNA酶增敏的微流控化學(xué)發(fā)光分析法與經(jīng)典的電位分析方法無顯著性差異，方法準(zhǔn)確可靠。
　　在上述已構(gòu)