裂殖酵母表現(xiàn)遺傳調(diào)控產(chǎn)孢及異染色質(zhì)沉默的研究.pdf

1、COMPASS復(fù)合物是真核生物中負(fù)責(zé)H3K4甲基化修飾的高度保守的蛋白復(fù)合體，負(fù)責(zé)激活一系列生物學(xué)過程中基因的轉(zhuǎn)錄。Ash2是COMPASS復(fù)合物的組成亞基之一。實驗室前期利用DNA損傷試劑對裂殖酵母的突變體庫進行大規(guī)模篩選，初步發(fā)現(xiàn)ash2+的缺失影響了眾多與DNA復(fù)制及細(xì)胞分裂相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄。本研究中我們通過序列比對發(fā)現(xiàn)Ash2有兩個保守的結(jié)構(gòu)域。ash2+的缺失降低了細(xì)胞的生長速度，提升了細(xì)胞對于TBZ藥物和氧化環(huán)境的敏感度。利用

2、熒光觀察及Western blot檢測發(fā)現(xiàn)Ash2定位于細(xì)胞核內(nèi)參與H3K4甲基化修飾。為了進一步研究Ash2在裂殖酵母中的功能，我們以Ash2作為誘餌蛋白進行酵母雙雜交篩庫，獲得了8個與Ash2相互作用的蛋白。其中，Ste4蛋白能夠與Ash2在體外發(fā)生結(jié)合。Ste4參與產(chǎn)孢，提示Ash2可能參與了裂殖酵母產(chǎn)孢過程。
　　在氮源缺乏及信息素存在的條件下，裂殖酵母進行減數(shù)分裂并完成產(chǎn)孢。在此過程中，信息素介導(dǎo)的MAPK信號通路調(diào)控了

3、減數(shù)分裂相關(guān)基因的表達。Spk1是MAPK通路的核心成員，它通過蛋白磷酸化的方式激活轉(zhuǎn)錄因子Ste11，Ste11負(fù)責(zé)激活mei2+，mam2+，map3+等減數(shù)分裂相關(guān)基因的表達。盡管組蛋白H3K4甲基化通過調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄表達參與了多個重要的生物過程，但它在裂殖酵母產(chǎn)孢過程中的作用并不清楚。本研究發(fā)現(xiàn)ash2+的缺失會引起裂殖酵母在氮源缺乏時產(chǎn)孢過程的延遲及產(chǎn)孢率下降。ChIP和RT-PCR分析結(jié)果顯示，ash2+的缺失降低了spk1+