人端粒酶組份在CIN及宮頸鱗癌中的表達及其診斷效能研究.pdf

1、宮頸癌是世界范圍內(nèi)女性第四位常見惡性腫瘤，2012年全球共有宮頸癌528000例，死亡266000例，85％發(fā)生于發(fā)展中國家[1]，也是嚴重威脅我國婦女健康的主要惡性腫瘤之一，發(fā)病率居女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之首。近年來隨著我國女性宮頸癌篩查工作的明顯加強，使其死亡率有所下降，但每年仍有約12萬新發(fā)病例[2]。因此，如何進一步擴大篩查面，同時提高篩查質(zhì)量、特異性、敏感性，開發(fā)新的預(yù)測性指標很有必要。目前臨床上廣泛使用的宮頸病變篩查手段主要有

2、人乳頭瘤病毒檢測(HPV)、液基細胞學(xué)檢查(TCT)及陰道鏡檢查等，但這些檢查都有相應(yīng)的缺點和不足。因而，從早診早治出發(fā)，臨床上需要其它更可靠指標或手段來協(xié)助進行綜合判斷，使宮頸癌的早期篩查更準確、更可靠，并更有預(yù)見性。
　　研究顯示，多種癌癥及癌前病變的組織中可檢測到端粒酶活性的高表達，且端粒酶活性與病變程度呈正相關(guān)[3]。宮頸癌變需經(jīng)歷宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變(Cervicalintraepithelial neoplasia，CI

3、N)、早期浸潤癌、浸潤癌等階段，歷時長達10余年，在宮頸病變發(fā)生、發(fā)展的過程中，是否伴有端粒酶活性的增加，端粒酶相關(guān)組分的表達程度如何變化，端粒酶相關(guān)檢測方法及指標是否可運用到臨床，其臨床診斷效能又如何呢？
　　目的：
　　本實驗擬檢測人端粒酶RNA組分(hTERC基因)及人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT蛋白)在CIN及宮頸鱗癌中的表達情況，并將檢測指標與常規(guī)宮頸疾病篩查手段比較，了解其在篩查中的診斷效能，以期為臨床尋求更有效的

4、宮頸病變篩查方案。
　　方法：
　　一、收集2012-2014就診于中國醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院、盛京醫(yī)院及遼寧省腫瘤醫(yī)院婦科并經(jīng)病理確診的患者，共140例，其中正常宮頸對照組20例，宮頸低度鱗狀上皮內(nèi)病變(LSIL)病例20例，宮頸高度上皮內(nèi)病變(HSIL)71例，宮頸鱗癌29例。統(tǒng)計所有患者的TCT結(jié)果及HPV檢查結(jié)果，并收集TCT殘留液及宮頸病理組織。
　　二、應(yīng)用熒光原位雜交(FISH)方法檢測宮頸脫落細胞中hTE

5、RC基因的擴增情況。
　　三、應(yīng)用免疫組化方法檢測宮頸組織TERT蛋白的表達。
　　四、應(yīng)用SPSS17.0將實驗結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　一、FISH法檢測hTERC基因在宮頸脫落細胞中的擴增:hTERC基因在正常宮頸、LSIL、HSIL及宮頸鱗癌組中的擴增率分別為0％、15％、59.2％及96.6％。采用卡方檢驗進行兩兩比較，正常組與LSIL組，p＞0.05，兩組間無統(tǒng)計學(xué)差異;LSIL組與HSI

6、L組，p＜0.05，兩組間有統(tǒng)計學(xué)差異;HSIL組與宮頸鱗癌組，p＜0.05，兩組間有統(tǒng)計學(xué)差異。hTERC基因擴增量隨著病變的嚴重程度而呈現(xiàn)逐漸遞增、擴增類型逐漸增多，多倍體高水平擴增比例增大。
　　二、免疫組化檢測TERT蛋白在宮頸組織中的表達:TERT蛋白染色表現(xiàn)為細胞核和/或細胞質(zhì)著色。TERT蛋白表達呈明顯的分層現(xiàn)象:在正常子宮頸鱗狀上皮及LSIL組中，TERT蛋白不表達或少量陽性細胞散在分布于子宮頸鱗狀上皮的基底層及上

7、皮下1/3;在HSIL組，陽性細胞達到上皮層的下2/3或達全層;宮頸鱗癌組中大部分癌細胞都呈陽性表達。TERT蛋白的陽性表達率分別為:正常宮頸5％（1例），LSIL組15％（3例），HSIL組66.2％（47例），宮頸鱗癌組96.6％（28例），TERT蛋白表達在LSIL與HSIL之間、HSIL與宮頸鱗癌組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)，但在正常組與LSIL組之間，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p＞0.05）。TERT評分隨著病變的嚴重程度而

8、呈現(xiàn)逐漸遞增，組間差異明顯。
　　三、hTERC基因、TERT蛋白及HR-HPV的相關(guān)性:一致性檢驗顯示hTERC基因擴增與TERT蛋白表達兩指標表達一致，Kappa=0.798，p＜0.001。相關(guān)性檢驗顯示三者表達呈正相關(guān)，p＜O.01。
　　四、宮頸鱗癌病例中hTERC、TERT表達與臨床、病理參數(shù)的關(guān)系:宮頸鱗癌組中，不同臨床分期及分化程度的病例，hTERC基因擴增及TERT蛋白表達陽性率在無明顯組間差異，但hTER

9、C基因擴增量及TERT蛋白評分組間差異明顯，晚期、低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例的hTERC基因擴增量明顯增多，TERT蛋白表達免疫組化評分也明顯升高。
　　五、診斷試驗評價及ROC曲線分析:TCT、HPV、hTERC基因及TERT蛋白診斷宮頸病變的靈敏度分別為74.8％、63.1％、71.8％及74.8％，特異度為81.1％、86.5％、97.3％及94.6％，ROC曲線下面積分別為:0.779，0.748，0.846，0.847。TC

10、T+TERT及TCT+hTERC篩查方案，靈敏度為90.3％及86.8％，較TCT或HPV檢查明顯提高，而漏診率顯著降低，診斷效能較高。
　　結(jié)論：
　　一、hTERC基因擴增及TERT蛋白表達隨著宮頸病變程度的加重而逐漸升高，提示兩指標可能作為新的腫瘤標記物，在宮頸疾病的診斷、分級及轉(zhuǎn)歸預(yù)判時有臨床實用意義。
　　二、在CIN及宮頸鱗癌中，hTERC基因擴增與TERT蛋白表達一致，HPV、hTERC基因及TERT蛋白