土壤化學屏障中聯(lián)苯菊酯快速檢測方法的研究.pdf

1、土壤化學屏障法(chemical soil barrier)作為一種有效的白蟻防治方法，被廣泛應用于我國新建房屋的白蟻預防。聯(lián)苯菊酯(bifenthrin)，擬除蟲菊酯類殺蟲劑、殺螨劑，具有殺蟲譜廣、高效等特點，對白蟻有強烈的趨避及毒殺作用，是我國乃至世界最常使用的白蟻防治藥劑之一。目前，雖有利用氣相色譜(GC)、高效液相色譜(HPLC)等儀器檢測聯(lián)苯菊酯的方法見諸報道，但儀器方法使用成本昂貴且難以在實驗室外的其他條件下應用與普及。為達

2、到現(xiàn)場快速檢測聯(lián)苯菊酯的目的，本研究制備了抗聯(lián)苯菊酯單克隆抗體并建立了ic-ELISA方法和膠體金免疫層析試紙條，為土壤化學屏障中聯(lián)苯菊酯的快速檢測提供了可靠依據(jù)。
　　本研究分別以聯(lián)苯菊酸、聯(lián)苯醇、聯(lián)苯菊酯為原料合成半抗原GFd、LBc和LBs。采用活潑酯法將上述3種半抗原分別與牛血清蛋白(BSA)偶聯(lián)制備免疫原。采用混合酸酐法將包括LBy在內(nèi)的4種半抗原分別與卵清蛋白(OVA)偶聯(lián)制備包被原。利用紫外波長掃描法證實半抗原偶聯(lián)成

3、功，并測定了7種人工抗原的偶聯(lián)結(jié)合比。通過免疫BALB/c小鼠、測定小鼠血清效價及細胞融合，篩選到一株能穩(wěn)定分泌抗聯(lián)苯菊酯單克隆抗體的雜交瘤細胞株，命名為3D4。經(jīng)測定，細胞株3D4分泌的單克隆抗體為IgG1型，輕鏈為kappa鏈。
　　利用制備的單克隆抗體建立了聯(lián)苯菊酯ic-ELISA方法，并對抗原抗體和包被原的工作濃度、封閉物以及工作緩沖液等條件進行了優(yōu)化。在最優(yōu)條件下，得到標準曲線的線性方程為B/Bo(％)=-0.3510L

4、ogC+0.0454，R2=0.9903，檢測范圍為0.004-0.7mg/L，IC50為0.05 mg/L，IC10為0.004 mg/L?？贵w與其他聯(lián)苯菊酯結(jié)構(gòu)類似物的交叉反應率均小于0.7％，表明抗體對聯(lián)苯菊酯具有較高的特異性。在黑土、黃土、紅土中分別添加2-10 mg/kg的聯(lián)苯菊酯標準品溶液，測得的平均回收率為83.5-104.7％，相對標準偏差為4.8-13.6％。利用建立的ic-ELISA方法對黃土真實樣品中聯(lián)苯菊酯含量進

5、行檢測，并與氣相色譜的檢測結(jié)果進行比較，得到相關性方程為y=1.0275x-0.2038，R2=0.9704，證明本研究建立的ic-ELISA方法具有較高的可靠性與準確性，可用于土壤化學屏障中聯(lián)苯菊酯的檢測。
　　本研究制備了膠體金免疫層析試紙條，并對人工抗原、NC膜、膠體金顆粒、試紙條參數(shù)及工作溶液（鹽離子強度、PEG20000含量、甲醇含量、pH值等）進行了優(yōu)化。結(jié)果表明，在最優(yōu)條件下，試紙條對聯(lián)苯菊酯的完全抑制濃度為60 m