嗜硫類磁性聚合物微球高效分離抗體.pdf

1、隨著生物技術(shù)和臨床治療的發(fā)展，對高純度、高活性IgG的需求日益增長，極大的促進了其純化工藝的發(fā)展。盡管傳統(tǒng)的沉淀法和離心過濾法已經(jīng)在IgG純化過程中大量使用，但其分離純度較低，生物活性不高，限制了其在許多領域廣泛利用。而色譜技術(shù)僅適合于分析檢測和小規(guī)模的分離，因此，發(fā)展新的非色譜技術(shù)，顯得非常重要。本文采用微懸浮聚合技術(shù)以醋酸乙烯酯和二乙烯基苯制備微米級的PVAc-DVB-Fe3O4磁性聚合物微球，通過偶聯(lián)恰當?shù)奶卣髋浜匣?，實現(xiàn)磁性聚合

2、物微球?qū)θ梭w免疫球蛋白G(IgG)的特異性分離。利用磁分離技術(shù)，直接從人血清中分離、純化人體免疫球蛋白G。在分離過程中，主要討論了血清與磁性微球的比例、吸附溶液和解吸附溶液的pH值、解吸附溶液的離子強度變化、吸附和解吸附的時間變化、吸附的溫度等因素對分離的影響，進一步探討了特異性吸附的作用方式，并通過高效液相排阻色譜法(HPSEC)和聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)測定蛋白法等分別進行了定性和定量分析，證明了此方法的可行性與可靠性

3、。主要研究結(jié)果如下：
　　 ⑴用化學共沉淀法制備了超順磁性、表面親油性的Fe3O4納米磁流體；通過微懸浮聚合法實現(xiàn)Vac和DVB單體對磁粒子的有效包裹，制備了平均粒徑為5.68mm的分散均勻的磁性聚合物微球，主要粒徑分布在1-10.5μm之間，其磁含量為25％，飽和磁強度達到17.1emu/g，且無剩磁。
　　 ⑵磁性聚合物微球表面有酯官能團(-OOC2H5)，通過水解反應在其表面生成豐富的羥基，通過Michael加成反

4、應，在其表面用二乙烯基砜活化，再在其表面修飾配基(5-甲基-2-巰基-1,3,4-噻二唑和2-巰基苯并咪唑-5-磺酸鈉二水合物)，制備嗜硫性磁性聚合物微球，實現(xiàn)嗜硫磁性聚合物微球?qū)θ梭w免疫球蛋白G(IgG)的特異性分離。
　　 ⑶研究了5-甲基-2-巰基-1,3,4-噻二唑配基修飾的嗜硫磁球分離血清的各種影響因素，結(jié)果表明較佳的分離條件為：吸附緩沖液的pH值為6.0；血清量是0.7mL/g；吸附溫度宜在室溫(廈門，三月份，25℃

5、左右)下；吸附時間選擇30min；解吸附溶液為1.0 mol/LNaCl溶液。
　　 ⑷研究了2-巰基苯并咪唑-5-磺酸鈉二水合物配基修飾的嗜硫磁球分離血清的各種影響因素，結(jié)果表明較佳的分離條件是：吸附緩沖液的pH值為6.0；血清量是0.5mL/g；吸附溫度宜在室溫(廈門，三月份，25℃左右)下；吸附時間選擇40min；解吸附溶液為0.2 mol/L(NH4)2SO4溶液。
　　 ⑸這種磁性聚合物微球從血清中分離抗體，表