產(chǎn)生物表面活性劑菌株的篩選及發(fā)酵條件的優(yōu)化.pdf

1、生物表面活性劑是一類由微生物產(chǎn)生的具有表面活性的物質(zhì),與化學表面活性劑相比,具有無二次污染、環(huán)境友好等顯著優(yōu)點。生物表面活性劑在醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)、石油開采、環(huán)境修復等方面的應(yīng)用潛力,已引起人們的廣泛關(guān)注。本課題從選育生物表面活性劑產(chǎn)生菌基礎(chǔ)性工作開始,并對菌株及其代謝產(chǎn)物進行了鑒定,對發(fā)酵培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進行了優(yōu)化研究。主要研究結(jié)果如下:
　　 從長期受石油浸染的特定環(huán)境中取樣,經(jīng)富集培養(yǎng)、平板分離、原油乳化等方法篩選得到9株乳化性能

2、較好的菌株。再通過搖瓶復篩,得到一株表面活性較強的菌株SFH-6。依據(jù)菌株的菌落、菌體形態(tài)觀察、生理生化特征及16S rRNA序列分析,初步鑒定菌株SFH-6為銅綠假單胞菌,命名為Pseudomonas aeruginosaSFH-6。該菌株發(fā)酵液稀釋10倍后的排油圈直徑可達5.2cm,表面活性較強,是一株具有研究價值的菌株。
　　 菌株SFH-6以甘油為碳源的產(chǎn)物經(jīng)酸水解后,再由3,5-二硝基水楊酸(DNS)法測定還原糖。還原

3、糖的增多初步表明菌株SFH-6所產(chǎn)表面活性物質(zhì)為糖脂類物質(zhì),然后經(jīng)紙層析法鑒定為鼠李糖,產(chǎn)物帶電性檢測表明為陰離子型,與鼠李糖脂性質(zhì)吻合,由此以初步推斷菌株SFH-6所產(chǎn)生物表面活性物質(zhì)為鼠李糖脂。對菌株SFH-6所產(chǎn)鼠李糖脂進行HPLC-MS分析,發(fā)現(xiàn)菌株SFH-6產(chǎn)物由9種鼠李糖脂同系物組成,各組分均由1-2分子鼠李糖與碳鏈長度為8-12的飽和或不飽和β-羥基脂肪酸組成,其中,含量最高的是雙鼠李糖脂(2-O-α-L-吡喃鼠李糖苷-α

4、-L-吡喃鼠李糖苷-β-羥基癸酰-β-羥基癸酸),占總產(chǎn)物的59.79％。
　　 采用單因素試驗對發(fā)酵培養(yǎng)基組分進行優(yōu)化,確定了菌株SFH-6產(chǎn)鼠李糖脂的最佳培養(yǎng)基組成為(g/L):甘油30,硝酸銨2.5,磷酸二氫鉀10,磷酸氫二鈉4。通過培養(yǎng)條件的優(yōu)化,確定了菌株SFH-6的最優(yōu)培養(yǎng)條件:種齡20 h,培養(yǎng)溫度30℃,接種量5％,裝液量35 mL/250mL三角瓶,搖床轉(zhuǎn)速180 r/min,初始pH值7.0,發(fā)酵周期72 h