功能型核苷酸用于光化學(xué)傳感器的研究.pdf

1、金屬離子,蛋白質(zhì)和核酸由于其與人類生產(chǎn)生活密切相關(guān)而一直是重要的分析對(duì)象。環(huán)境中微量的重金屬可以通過食物鏈富集,人通過飲用或食用受重金屬污染的水或食物使體內(nèi)重金屬濃度不斷積累,當(dāng)其超過一定的限度時(shí),會(huì)導(dǎo)致各種疾病。而核酸是生命體基本的遺傳物質(zhì),其堿基的突變會(huì)引起多種遺傳性疾病。此外,蛋白質(zhì)是生命活動(dòng)的物質(zhì)基礎(chǔ),一些蛋白質(zhì)的含量已經(jīng)成為了臨床診斷一些疾病的重要指標(biāo)。因此,建立簡單快速檢測金屬離子,蛋白質(zhì)和核酸的分析方法具有重要的生物學(xué)意義

2、。光化學(xué)生物傳感器由于具有檢測限低,分析速度快,能夠?qū)崿F(xiàn)實(shí)時(shí)無損分析等諸多優(yōu)點(diǎn)而有廣闊的研究前景。本文發(fā)展了幾種檢測金屬離子,蛋白質(zhì)和特異性基因序列的光化學(xué)檢測方法:
　　 (1)結(jié)合特異性DNAzyme與實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),發(fā)展了一種無標(biāo)記的鉛離子傳感器。具體方法如下:底物鏈的兩端分別延伸了兩個(gè)與引物雜交的區(qū)域,鉛離子催化DNAzyme將底物鏈切割,導(dǎo)致其濃度下降。通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR測定底物鏈的濃度從而達(dá)到鉛離子檢測的

3、目的。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該傳感器對(duì)鉛離子從10 nM到5μM有良好的動(dòng)態(tài)響應(yīng),檢測下限為1 nM。此外,該傳感器對(duì)其它一些可能與鉛離子共存的二價(jià)離子具有良好的抗干擾能力。
　　 (2)提出了一種新型的均相熒光保護(hù)法,基于我們的分析原理,實(shí)現(xiàn)了對(duì)IgE的快速高靈敏檢測。標(biāo)記了異硫氰酸熒光素(FITC)的IgE適配體與IgE結(jié)合后,阻礙了抗異硫氰酸熒光素抗體(anti-FITC)與FITC的結(jié)合而產(chǎn)生FITC的熒光,通過檢測熒光強(qiáng)度實(shí)現(xiàn)對(duì)

4、IgE的定量檢測。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該方法對(duì)IgE從1 nM到40 nM具有良好的線性范圍,檢測下限達(dá)到0.1 nM。此外,該傳感器對(duì)血清中其它的蛋白質(zhì)具有很好的抗干擾能力。
　　 (3)利用單壁碳納米管的熒光淬滅能力,建立了一種檢測目標(biāo):DNA序列的生物傳感器。目標(biāo)序列與纏繞在SWCNT。表面的標(biāo)記有熒光團(tuán)羧基熒光素(FAM)的單鏈DNA雜交,將其從SWCNT表面置換下來,恢復(fù)單鏈DNA上FAM的熒光,通過檢測溶液的熒光強(qiáng)度達(dá)到檢測