艾灸燃煙自由基及其生物活性研究.pdf

1、艾灸是中國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的瑰寶，其將艾葉卷制成艾條，暗火燃燒，在人體的穴位上灸之，產(chǎn)生熱作用、藥性作用與光輻射作用的綜合效應(yīng)，共同通過(guò)作用于人體的經(jīng)絡(luò)腧穴，達(dá)到治病和保健目的的一種外治方法。關(guān)于藥性作用的研究，人們普遍集中于艾葉與艾煙穩(wěn)定化學(xué)成分研究，對(duì)艾煙中不穩(wěn)定物質(zhì)如自由基研究較少，已有研究表明自由基既有生理作用同時(shí)也具有一定的病理作用。所以能從自由基角度去分析艾灸的安全性與有效性是應(yīng)該是非常有意義的。
　　本論文以艾灸燃煙為研究對(duì)

2、象，檢測(cè)艾葉燃煙中活性自由基，從自由基的角度來(lái)分析艾灸的安全性；同時(shí)找到了研究自由基生物活性的方法，以對(duì)苯二酚在堿性條件下再現(xiàn)自由基分析其抑菌活性，為艾灸燃煙為何用于室內(nèi)空氣消毒提供了理論依據(jù)。并采用微波法合成了艾煙中發(fā)現(xiàn)的5-叔丁基連苯三酚，為后續(xù)研究提供原材料。研究的主要工作如下：
　　1、DPPH(1，1-二苯基-2-苦基肼自由基)是一種穩(wěn)定的自由基，在甲醇溶液中溶解度較好，顏色呈現(xiàn)深紫色。當(dāng)抗自由基物質(zhì)與DPPH發(fā)生作用，

3、其顏色就會(huì)變淺，可通過(guò)分光光度計(jì)測(cè)量其變化程度，從而間接判斷抗自由基物質(zhì)的含量。本章就是采用分光光度法，分別比較艾灸燃煙與艾灸燃煙中穩(wěn)定物質(zhì)對(duì)DPPH自由基的作用，通過(guò)兩者紫外吸光度差值來(lái)間接說(shuō)明艾灸燃煙自由基的存在，同時(shí)比較不同儲(chǔ)藏期的艾灸燃煙自由基濃度的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)艾灸燃煙中清除DPPH自由基的成分既有穩(wěn)定的化學(xué)物質(zhì)，也有不穩(wěn)定的自由基，隨著儲(chǔ)藏期的延長(zhǎng)，自由基濃度減少。其中1年艾葉燃煙中自由基含量最高，3年與5年艾葉燃煙中自由基

4、含量相當(dāng)，3年比5年稍微高一些。這是因?yàn)殡S著儲(chǔ)藏期的延長(zhǎng)，艾葉中揮發(fā)油會(huì)減少，而揮發(fā)油經(jīng)高溫裂解可生成多種活性自由基，所以1年艾葉燃煙中含自由基最多，5年艾葉燃煙含量最少。艾灸燃煙自由基的存在與其濃度隨儲(chǔ)藏期變化可以更進(jìn)一步地闡釋艾灸的生物活性與安全性。
　　2、艾煙常用于室內(nèi)的空氣消毒，其效果還比較好，我們猜這其中起作用應(yīng)不止是艾煙中穩(wěn)定的化合物，還有艾煙中不穩(wěn)定的物質(zhì)如自由基，所以本章就探究了自由基對(duì)細(xì)菌的作用效果。本章實(shí)驗(yàn)內(nèi)

5、容是應(yīng)用電子自旋共振（ESR）驗(yàn)證對(duì)苯二酚在堿性條件下產(chǎn)生的半醌自由基，并應(yīng)用HPLC法檢測(cè)對(duì)苯二酚在堿性條件下的反應(yīng)產(chǎn)物；應(yīng)用打孔法，研究對(duì)苯二酚在堿性條件下對(duì)BL21大腸桿菌、MRSA、MSSA3種菌的抑菌作用，并采用了96孔板法研究其對(duì)這3種菌的最小抑菌濃度（MIC）；同時(shí)通過(guò)測(cè)量這3種細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線來(lái)比較對(duì)苯二酚在PH=7.5與PH=6條件下的抑菌活性，及其對(duì)MRSA、BL21大腸桿菌、MSSA3種菌的抑菌活性。結(jié)果為ESR檢測(cè)

6、到對(duì)苯二酚在堿性條件下產(chǎn)生半醌自由基，半衰期較長(zhǎng)，其抑菌作用較對(duì)苯二酚和對(duì)苯二酚在堿性條件下放置2天后產(chǎn)生的最終產(chǎn)物都強(qiáng)；對(duì)苯二酚在堿性條件下的抑菌作用遠(yuǎn)遠(yuǎn)強(qiáng)于其在中性或者偏酸性條件下，說(shuō)明半醌自由基參與了抑菌作用且是活性較高的物質(zhì)。
　　3、5-叔丁基連苯三酚是從艾煙中分離出的一種代表性的酚類物質(zhì)，本課題組已分析了其抗菌作用，但是關(guān)于此化合物的來(lái)源，只發(fā)現(xiàn)一篇文獻(xiàn)報(bào)道了此化合物的合成，且合成步驟繁瑣，收率不高，因此為了后續(xù)課題組