阿德福韋酯治療前后乙型肝炎病毒Pre-S區(qū)基因突變分析.pdf

1、乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染是全球性的重要公共衛(wèi)生問題，嚴(yán)重影響人類健康。HBV逆轉(zhuǎn)錄酶缺乏校正功能，在選擇壓力作用下，HBV在復(fù)制過程中會(huì)產(chǎn)生大量變異株。Pre-S區(qū)是HBVDNA中變異最大的區(qū)段，容易出現(xiàn)缺失突變。Pre-S區(qū)缺失熱點(diǎn)區(qū)域?yàn)镻re-S1的3'末端和Pre-S2的5'末端，可伴有Pre-S2起始密碼子的缺失或點(diǎn)突變，而且在B和C基因型中發(fā)生頻率高。大量研究證實(shí)，Pre-S區(qū)缺失突變可作

2、為一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因素，與肝細(xì)胞癌發(fā)生具有密切關(guān)系。因此有效抑制HBV DNA尤其是Pre-S區(qū)缺失突變毒株的復(fù)制可能有利于減少HCC的發(fā)生。核苷（酸）類似物是臨床上抗HBV的常用藥物，能夠抑制HBV DNA復(fù)制，降低血清ALT水平，改善肝組織學(xué)。但是有研究表明，Pre-S區(qū)缺失突變也可在使用核苷（酸）類似物治療是出現(xiàn)，而且Pre-S區(qū)缺失突變毒株對(duì)于這類藥物的反應(yīng)性并不清楚。因此，解決這一疑問是關(guān)系到臨床用藥的安全性問題。
　　目的

3、:觀測(cè)阿德福韋酯(ADV)治療慢性HBV患者基線和48W時(shí)血清中HBV DNA Pre-S區(qū)突變情況。
　　方法:提取61位患者基線和48W血清中HBV DNA，用半巢式PCR擴(kuò)增Pre-S區(qū)。PCR產(chǎn)物純化后，與pMD19-T Simple Vector連接進(jìn)行TA克隆，隨機(jī)挑取30個(gè)陽性克隆測(cè)序。采用我室建立的熒光定量分型PCR方法測(cè)定HBV DNA病毒載量。HBsAg、 HBeAg、 HBeAb采用美國(guó)雅培（Abbott）公

4、司和上海科華公司相應(yīng)試劑盒檢測(cè)。ALT采用Roche Modular DDP全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)。
　　結(jié)果:1、基線時(shí)，55.7％(34/61)的患者血清中可檢測(cè)到Pre-S突變體;ADV治療48W時(shí)，37.7％(23/61)的患者血清中可檢測(cè)到Pre-S突變體。在有Pre-S區(qū)突變感染患者中，除了患者X39在基線時(shí)只有突變型外，其余患者在基線和48W時(shí)均為突變和野生型混合感染。根據(jù)基線時(shí)是否有Pre-S突變型感染，將患者分成野

5、生型感染組（W-0）和突變型感染組(M-0)?；€時(shí)，2組在性別、年齡、基因型、血清HBV DNA載量和ALT水平上均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。ADV治療48W，M-0組血清HBV DNA病毒載量和ALT水平明顯降低，HBeAg陰轉(zhuǎn)率明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　2、患者X37在ADV治療48W時(shí)，第7號(hào)克隆在nt2978和nt2979之間出現(xiàn)一個(gè)長(zhǎng)度45bp插入片段。此片段與該克隆序列的nt2934-2978完全相同。
　　3、基線時(shí)

6、，61名患者均為HBV B和/或C型感染。ADV治療48W，C型和B/C混合型感染患者的基因型發(fā)生變化。20名C型感染患者，有5名患者的基因型轉(zhuǎn)變?yōu)閱我坏腂型，6名患者的基因型轉(zhuǎn)變?yōu)锽/C混合型。3名B、C混合感染的患者，1名轉(zhuǎn)變?yōu)閱我籆型;1名轉(zhuǎn)變?yōu)閱我籅型;1名仍然是混合型感染，但是B型占陽性克隆比例增加。用藥后48W，C型和B/C混合型患者中出現(xiàn)B基因型（即C型減少的患者），HBV病毒載量下降≥2log10的人數(shù)比率明顯高于48W