輔酶Q10對(duì)口腔潰瘍影響的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　 通過建立大鼠的口腔潰瘍動(dòng)物模型，觀察輔酶Q10對(duì)大鼠口腔潰瘍的影響，驗(yàn)證其對(duì)口腔潰瘍的防治作用，并對(duì)輔酶Q10的作用機(jī)制進(jìn)行初步探討，為臨床口服藥物防治口腔潰瘍提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法:
　　 運(yùn)用崔相一[1]、彭玉梅[2]等人的模型制備方法選取6周齡200g左右SD大鼠23只，利用spss軟件隨機(jī)分為3組:正常對(duì)照組(normalcontrolgroup，NCG)5只;輔酶Q10應(yīng)用組(coen

2、zymeQ10group，CoQ10G)8只;口腔潰瘍對(duì)照組(oralulcermodelgroup，OUMG)8只，另有2只用于口腔潰瘍模型鑒定（提供正常組織和潰瘍組織標(biāo)本）。動(dòng)物分籠飼養(yǎng)，自由攝食攝水。適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，正常對(duì)照組不作處理，其它兩組抓取固定后，用蘸有體積分?jǐn)?shù)為40％冰醋酸的直徑3mm濾紙貼付于大鼠右側(cè)口角偏下唇處，作用60s，生理鹽水沖洗1min。24小時(shí)后觀察大鼠右側(cè)口角黏膜約3mm直徑潰瘍形成，表面黃白色假膜覆蓋

3、，邊緣充血水腫。輔酶Q10應(yīng)用組每日給藥288mg/kg，正常對(duì)照組及口腔潰瘍對(duì)照組每日給等容量雙蒸水，給藥方式皆為灌胃。各實(shí)驗(yàn)組(CoQ10G、OUMG)分別于給藥的第3天，第5天，第8天隨機(jī)抽取一只大鼠觀察潰瘍愈合情況并處死迅速切取潰瘍的口腔黏膜組織置于4％多聚甲醛溶液中，行HE染色組織病理學(xué)檢查和免疫組化分析，其它大鼠記錄愈合日期，潰瘍剛好全部愈合后，頸椎脫臼法處死三組大鼠并迅速剪取口腔黏膜潰瘍組織及正常對(duì)照組相應(yīng)部位組織，-80

4、℃保存，分光光度法測(cè)超氧化物歧化酶SOD(superoxidedismutase，SOD)的活性、硫代巴比妥酸(thibabituricacid，TBA)法測(cè)丙二醛MDA(Malondialdehyde)的含量。
　　 結(jié)果:
　　 1、創(chuàng)傷性口腔潰瘍動(dòng)物模型的建立
　　 冰醋酸處理大鼠24h后大鼠相應(yīng)黏膜處形成3mm直徑的圓形缺損，略為凹陷，邊緣整齊，周邊紅腫充血，表面黃白色假膜覆蓋。
　　 2、組織形

5、態(tài)學(xué)觀察（模型鑒定）
　　 正常大鼠口腔黏膜組織:大鼠口腔黏膜上皮完整連續(xù)，基底層、棘層、顆粒層、角化層細(xì)胞排列有序，胞核胞漿清晰無異型性表現(xiàn)、無空泡性變，上皮下固有層炎性細(xì)胞少，上皮釘突較短且整齊(Fig.1)。
　　 大鼠口腔潰瘍黏膜組織:口腔黏膜上皮層連續(xù)性中斷，潰瘍達(dá)棘層，可見棘層以上細(xì)胞不規(guī)則，邊緣不清晰，胞核固縮，胞漿空泡性變，大量細(xì)胞崩解，細(xì)胞間散在淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞浸潤，基底層細(xì)胞可見核濃染，核漿比增大

6、，上皮釘突延長，潰瘍表面有紅染的壞死組織覆蓋(Fig.2)。
　　 3、一般狀況
　　 實(shí)驗(yàn)組（CoQ10組、OUM組）與正常對(duì)照組相比較，一般狀況無明顯改變。
　　 4、肉眼觀察
　　 給藥第3日，輔酶Q10應(yīng)用組充血水腫稍有減輕，其它組未見改變;
　　 給藥第5日，輔酶Q10應(yīng)用組潰瘍面積減小，充血水腫減輕，口腔潰瘍對(duì)照組個(gè)別大鼠水腫減輕;
　　 給藥第8日，輔酶Q10應(yīng)用組潰瘍面積縮

7、小，假膜脫落，充血不明顯，口腔潰瘍對(duì)照組，水腫減輕，個(gè)別大鼠假膜脫落。
　　 給藥第13日，輔酶Q10應(yīng)用組潰瘍?nèi)坑?，上皮?xì)胞完全覆蓋潰瘍面，周圍顏色和質(zhì)地均與正常黏膜無差異，口腔潰瘍對(duì)照組大部分已恢復(fù)正常色澤和質(zhì)地，僅個(gè)別大鼠原潰瘍處點(diǎn)狀充血。
　　 5、鏡下觀察
　　 給藥第3日,輔酶Q10應(yīng)用組和口腔潰瘍對(duì)照組上皮均不完整，棘層以上細(xì)胞邊緣不清晰，大量細(xì)胞空泡性變，細(xì)胞間淋巴細(xì)胞浸潤(Fig.3、Fig

8、.6);
　　 給藥第5日，輔酶Q10應(yīng)用組空泡性變的細(xì)胞減少，細(xì)胞間炎性細(xì)胞減少，基底細(xì)胞規(guī)整，口腔潰瘍對(duì)照組異常細(xì)胞有所減少(Fig.4、Fig.7);
　　 給藥第8日，輔酶Q10應(yīng)用組上皮層趨于正常，表層變性壞死的細(xì)胞減少，細(xì)胞排列趨于規(guī)整，上皮下層成纖維細(xì)胞排列緊密，口腔潰瘍對(duì)照組仍可見不規(guī)整細(xì)胞和較多的炎性細(xì)胞（Fig.5、Fig.8）。
　　 6、免疫組織化學(xué)觀察
　　 正常對(duì)照組及潰瘍當(dāng)日

9、對(duì)大鼠口腔黏膜上皮CK19的表達(dá)較少，僅在上皮基底層散在表達(dá)。(Fig.9、Fig.10)
　　 給藥第3日，口腔潰瘍對(duì)照組和輔酶Q10應(yīng)用組CK19的表達(dá)率均較少，直到給藥第5日，兩者上皮顆粒層大量表達(dá)CK19;給藥第8日，CK19表達(dá)率進(jìn)一步提高，可見輔酶Q10應(yīng)用組比口腔潰瘍對(duì)照組CK19表達(dá)率更高(Fig.11-Fig.16)。
　　 7、口腔黏膜組織勻漿SOD活性程度及MDA含量檢測(cè)
　　 正常對(duì)照組中

10、SOD含量（131.01±16.09）U/mg均高于輔酶Q10應(yīng)用組及口腔潰瘍對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，MDA含量(1.31±0.15)nmol/mg均低于輔酶Q10應(yīng)用組及口腔潰瘍對(duì)照組，差異有顯著性(P＜0.05);
　　 并且，輔酶Q10應(yīng)用組口腔黏膜組織中SOD水平（114.81±3.69）U/mg相比口腔潰瘍對(duì)照組（89.65±12.50）U/mg高，MDA含量（1.83±0.13）nmol/mg相比口

11、腔潰瘍對(duì)照組（2.26±0.13）nmol/mg低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)（見Table2、Fig.Ⅰ、Fig.Ⅱ）。
　　 8、口腔潰瘍對(duì)照組和輔酶Q10應(yīng)用組大鼠潰瘍愈合時(shí)間比較
　　 口腔潰瘍對(duì)照組大鼠潰瘍愈合時(shí)間12±1.58d，輔酶Q10應(yīng)用組大鼠潰瘍愈合時(shí)間9.4±1.14d，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可以認(rèn)為輔酶Q10應(yīng)用組先于口腔潰瘍對(duì)照組愈合。
　　 結(jié)論:
　　 1、用

12、體積分?jǐn)?shù)40％的冰醋酸燒灼大鼠口腔黏膜的方法可以造成其損傷性淺層潰瘍，愈合時(shí)間大約13天。
　　 2、口腔潰瘍有自愈傾向，從組織病理形態(tài)學(xué)和免疫組織化學(xué)方面均證實(shí)，以水溶性輔酶Q10灌胃的大鼠比口腔潰瘍對(duì)照組大鼠愈合快且好。
　　 3、用化學(xué)分析的方法測(cè)定大鼠口腔黏膜組織中SOD、MDA的含量，發(fā)現(xiàn)正常組織中有一定的抗氧化能力，并且輔酶Q10能夠增強(qiáng)抗氧化系統(tǒng)功能同時(shí)抑制脂質(zhì)過氧化作用，起到促進(jìn)潰瘍愈合的功效。