中藥材及其制劑中馬兜鈴酸含量測定方法的研究.pdf

1、中草藥在我國已歷經(jīng)數(shù)千年，經(jīng)過我們祖先祖祖輩輩的長期使用被證明是有效的，從而形成了燦爛的中醫(yī)藥文化。但中草藥至今無法成為世界普遍認(rèn)可的藥物，其主要原因在于成分過于復(fù)雜，大部分無法闡明其確切的有效成分和藥理作用，有的無穩(wěn)定可靠的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可循。近年來，馬兜鈴酸的致瘍作用和由馬兜鈴酸導(dǎo)致的腎病引起國內(nèi)外的廣泛關(guān)注，使部分中草藥和中成藥在國外遭到禁用，中藥國際化進(jìn)程受到巨大影響。 含馬兜鈴酸的中藥材中大部分已有馬兜鈴酸含量測定方法的文獻(xiàn)

2、報道，但一般是一種含測方法針對一種藥材，缺乏比較系統(tǒng)的研究。為了更好的控制含馬兜鈴酸藥材及其制劑中馬兜鈴酸的含量，需要建立一種準(zhǔn)確可靠，簡便易行，適用于多數(shù)中藥材及其制劑中馬兜鈴酸含量測定的方法。本論文參考以往的文獻(xiàn)，建立了一種適用性較廣的馬兜鈴酸檢測方法。目前文獻(xiàn)中馬兜鈴酸的含量測定方法主要有： TLCS、HPLC、LC-MS等。其中HPIC應(yīng)用的最多，對照多選用馬兜鈴酸Ⅰ(A)、馬兜鈴酸Ⅱ(B)。本課題分別對TLCS、HPL

3、C的最低檢測限進(jìn)行考察，結(jié)果表明，HPLC法的檢測限大大低于TLCS法的檢測限，考慮到樣品中馬兜鈴酸的含量差異大，部分樣品含量較低，所以在本課題中，重點(diǎn)對HPLC法測定馬兜鈴酸A含量進(jìn)行系統(tǒng)的研究。本文對馬兜鈴酸含量測定的方法進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，對提取溶劑、提取方法、提取時間進(jìn)行了考察，選擇甲醇．甲酸(98:2)為提取溶劑，采用加熱回流2小時的方法進(jìn)行提取。通過馬兜鈴酸Ⅰ、馬兜鈴酸Ⅱ的分離度，理論塔板數(shù)確定選用的流動相為乙腈-0.3％碳酸

4、銨溶液(用稀鹽酸調(diào)pH值7.5)(25:75)，確定檢測波長為250 nm。 方法學(xué)研究中，按照《中國藥典》2005年版一部附錄新增的“中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗證指導(dǎo)原則”，首先對馬兜鈴酸A的線性范圍進(jìn)行考察，結(jié)果表明馬兜鈴酸A進(jìn)樣量在1ng～511ng之間，峰面積值與馬兜鈴酸A的量呈較好的線性，r=1.0000。其次對方法的重復(fù)性、中間精密度、重現(xiàn)性，加樣回收率、耐用性等進(jìn)行考察。該方法重復(fù)性、中間精密度試驗結(jié)果的RSD分別為1

5、.25％、1.45％，重現(xiàn)性試驗結(jié)果相對偏差為3.70％；重復(fù)性、加樣回收試驗中，按“中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗證指導(dǎo)原則”的要求，對范圍進(jìn)行考察，重復(fù)性試驗樣品的取樣量從0.25～0.75g，加樣回收試驗對照品的加入量為0.20～0.30 mg，平均加樣回收率為100.9％，RSD為2.09％。耐用性試驗從變化流動相組成比例及流動相pH值、選用不同的色譜柱等方面對建立的方法進(jìn)行耐用性試驗，試驗結(jié)果說明建立的方法。試驗結(jié)果表明，所建立的方法

6、專屬、靈敏、準(zhǔn)確、耐用性較好，能夠滿足中藥材及其制劑中馬兜鈴酸含量測定的要求。對采集及收集到的馬兜鈴屬及細(xì)辛屬具有法定中藥材標(biāo)準(zhǔn)的22個中藥材樣品進(jìn)行了品種鑒定，再采用建立的HPLC法對其中的馬兜鈴酸A進(jìn)行測定，試驗結(jié)果表明所建立的方法專屬、準(zhǔn)確、靈敏，適用性廣，完全可以滿足中藥材中馬兜鈴酸含量測定的要求。根據(jù)試驗測得的各個藥材含馬兜鈴酸的量結(jié)合文獻(xiàn)報道的馬兜鈴酸安全劑量，計算出了藥材的每日最大攝入量，為相關(guān)品種的安全評價提供重要的參考

7、。測定的藥材中苕葉細(xì)辛Asarum caudligelellum C．Y．cheng et C．S．Yang和山慈姑Asarum sugittarioides C．F．Liang2種已有法定藥材標(biāo)準(zhǔn)的馬兜鈴科藥材的含量測定均未見文獻(xiàn)報道。 建立了HPLC方法測定含有馬兜鈴科馬兜鈴屬朱砂蓮藥材的成藥朱砂蓮膠囊中馬兜鈴酸A的含量并進(jìn)行了方法學(xué)驗證。應(yīng)用建立的方法測定了兩個廠家6批樣品中馬兜鈴酸A的含量。 本課題的研究結(jié)果可以