滇南邊境地區(qū)蟲媒病毒調(diào)查研究.pdf

1、研究目的:云南省地處中國(guó)西南邊陲，位于北緯21°8'32''—29°15'8''，東經(jīng)97°31'39''—106°11'47''之間，北回歸線橫貫本省南部。云南省西部和西南部與緬甸接壤，南部與越南、老撾毗鄰，是我國(guó)毗鄰周邊國(guó)家最多、邊境線最長(zhǎng)的省區(qū)之一。云南地勢(shì)西北高東南低，海拔高差異常懸殊，最高為6740米，最低僅76．4米。地域遼闊、自然條件復(fù)雜、垂直氣候明顯。夏季，陰雨天氣多，適于各類宿主動(dòng)物、吸血節(jié)肢動(dòng)物的生存繁殖和某些蟲媒病

2、毒的存在及傳播，而且梁國(guó)棟、張海林等已經(jīng)在云南省分離到乙型腦炎病毒、登革熱病毒、基孔肯雅（CHIK）病毒、辛德畢斯病毒、巴泰病毒、版納病毒（banna virus），并且在蚊蟲活動(dòng)高峰的時(shí)候，當(dāng)?shù)赝瑫r(shí)存在病因不明的發(fā)熱和病毒性腦炎患者，提示當(dāng)?shù)卮嬖谄渌x媒病毒性疾病的可能性。加之旅游和邊境貿(mào)易的往來(lái)頻繁。因此，對(duì)滇南邊境地區(qū)進(jìn)行蟲媒病毒病原學(xué)的調(diào)查，全面了解當(dāng)?shù)卮嬖诤脱h(huán)的蟲媒病毒種類與分布情況，對(duì)于研究我國(guó)云南的蟲媒病毒生物學(xué)及分子生

3、物學(xué)特征、預(yù)防和控制當(dāng)?shù)叵x媒病毒病等均具有重要意義。 本課題對(duì)滇南部分邊境地區(qū)進(jìn)行蟲媒病毒調(diào)查，于2006年8月在祿豐縣、勐海縣、景洪市；2007年9月份在文山、河口和麻栗坡縣共6個(gè)地區(qū)采集蚊蟲標(biāo)本并進(jìn)行蟲媒病毒的分離鑒定。勐?？h、景洪市；2007年9月份在文山、河口和麻栗坡縣共6個(gè)地區(qū)采集蚊蟲標(biāo)本并進(jìn)行蟲媒病毒的分離鑒定。 研究?jī)?nèi)容:標(biāo)本采集于2006、2007年8～9月在云南省的勐?？h、祿豐縣、景洪市、麻栗坡縣、河口

4、縣、文山縣6市縣共10個(gè)采集點(diǎn)，夜間在人房和畜圈（舍）采集蚊蟲標(biāo)本，分類后按蚊種進(jìn)行分裝，立即凍存于液氮中直至用于病毒分離。兩年共采集15801只，其中庫(kù)蚊11970只，按蚊為2712只，伊蚊1066只，阿蚊53只。本次采集蚊蟲標(biāo)本分類可見，云南省蚊蟲仍然以三帶喙庫(kù)蚊為當(dāng)?shù)貎?yōu)勢(shì)蚊種。 研究方法:首先把采集到的蚊蟲標(biāo)本（191批）全部研磨，采用組織細(xì)胞培養(yǎng)的方法分離病毒，將蚊蟲研磨處理后的離心上清接種C6/36細(xì)胞，再用病變C6/

5、36細(xì)胞上清接種BHK—21細(xì)胞，最后通過(guò)形態(tài)學(xué)、血清學(xué)、分子生物學(xué)方法鑒定。 結(jié)果:共獲得15株可引起細(xì)胞規(guī)律病變的分離物，有10株分離自三帶喙庫(kù)蚊，3株分離自伊蚊，其他2株分離自按蚊。最后鑒定結(jié)果為版納病毒（BAV）1株，淡色庫(kù)蚊濃核病毒（CppDNV）5株、還有9株分離物需要進(jìn)一步鑒定。 版納病毒（BAV）：從三帶喙庫(kù)蚊中分離到1株BAV，通過(guò)測(cè)定這個(gè)分離株第12片段編碼區(qū)序列，結(jié)果顯示BAV可分為兩個(gè)進(jìn)化群，即印

6、度尼西亞和中國(guó)，顯示了病毒在地域分布上的差異。但是，新分離WS0704—2與來(lái)自遼寧（LN0684、LN0688、LN0689）和北京（BJ95—75）的中國(guó)分離株具有明顯的不同，位于一條獨(dú)立的進(jìn)化枝中，說(shuō)明該地區(qū)分布的BAV在進(jìn)化上相對(duì)獨(dú)立。 濃核病毒（DNV）：從三帶喙庫(kù)蚊、按蚊兩種蚊種中分離到5株DNV。DNV是一種昆蟲病毒，該病毒通常對(duì)節(jié)肢動(dòng)物宿主有一定致病性。在我國(guó)遼寧、云南、新疆和貴州省的淡色庫(kù)蚊、三帶喙庫(kù)蚊、致倦庫(kù)

7、蚊、中華按蚊等蚊蟲中均分離到該病毒，提示CppDNV廣泛分布于我國(guó)境內(nèi)。CppDNV對(duì)C6/36細(xì)胞具有典型的CPE效應(yīng)，而并不在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中增殖和產(chǎn)生病變（盡管在自然界中CppDNV很好的適應(yīng)了其蚊蟲宿主）。 研究意義及創(chuàng)新性:首次在我國(guó)滇南邊境地區(qū)蚊蟲種類及蟲媒病毒調(diào)查，了解了滇南邊境地區(qū)蚊蟲種類和分布特征；從蚊蟲標(biāo)本中分離到了BAV、DNV共2種蟲媒病毒，不但豐富了我國(guó)云南省滇南邊境蟲媒病毒的種類，而且為了解當(dāng)?shù)貍魅静〔?/p>

8、因及病毒性傳染病的預(yù)防控制提供了極為重要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，將產(chǎn)生極大的社會(huì)效益。 本研究中分離的BAV是首次在文山分離到，該病毒屬于Seadorna病毒屬3個(gè)成員中的一種病毒（BAV），說(shuō)明該區(qū)域是雙鏈RNA病毒活躍的地區(qū)。BAV的存在與當(dāng)?shù)厝诵蠹膊〉年P(guān)系尚待考證。首次在滇中和滇南邊境地區(qū)分離到5株DNV病毒，對(duì)了解，此類病毒的分布和分子遺傳特征有重要意義。此次調(diào)查豐富了我國(guó)蟲媒病毒分子生物學(xué)研究?jī)?nèi)容，為深入研究我國(guó)存在和流行的蟲媒病