解偶聯(lián)蛋白2和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶在缺血預(yù)適應(yīng)心肌中的表達(dá).pdf

1、背景與目的：
　　解偶聯(lián)蛋白-2(UCP2)是一種載體蛋白，具有提高心肌細(xì)胞耐氧化應(yīng)激的能力，對抗心肌再灌注損害的作用。它被定位于線粒體內(nèi)膜上，參與氧化磷酸化與三磷酸腺苷合成解偶聯(lián)的生物氧化過程，通過抑制活性氧的生成而發(fā)揮其心肌保護(hù)作用。在體內(nèi)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)NOS有三種不同的亞型，其中eNOS（內(nèi)皮型一氧化氮合酶）和iNOS（誘導(dǎo)型一氧化氮合酶）被認(rèn)為是與心肌缺血再灌注損傷(MIRI)有關(guān)的主要亞型，他們作用的發(fā)揮皆是通過催化生成NO而

2、實現(xiàn)的。NO具有舒張血管的生物活性，其作用的發(fā)揮與生產(chǎn)的NO濃度高度相關(guān)，即較低濃度表現(xiàn)為保護(hù)作用，而過高濃度則表現(xiàn)為毒性作用。心肌缺血預(yù)適應(yīng)(IPC)定義為短時間內(nèi)間斷多次連續(xù)的心肌缺血可以更好地耐受其后較長時間內(nèi)的缺血，抑制心肌細(xì)胞損害，庇佑缺血心肌。IPC保衛(wèi)缺血心肌的作用一方面是通過刺激產(chǎn)生內(nèi)源性保護(hù)蛋白，另一方面通過細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，改變通路中基因和蛋白的表達(dá)，從而達(dá)到實現(xiàn)心肌自我防護(hù)的目的。由于研究層次不斷加深，觀察到一些藥

3、物具有相似的心肌保護(hù)功效，即藥物預(yù)適應(yīng)。目前關(guān)于IPC與UCP2的關(guān)系，多數(shù)集中在缺血缺氧的刺激，藥物預(yù)適應(yīng)則研究較少，而iNOS在MIRI中的作用如何，目前研究雖多，但爭論頗大。多數(shù)學(xué)者致力于研究ACEI或ARB類藥物，已經(jīng)證明其具備心肌保護(hù)功能。本實驗致力于構(gòu)造心肌缺血再灌注損傷模型，重點檢測大鼠心肌組織中解偶聯(lián)蛋白-2(UCP2)和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)兩種蛋白因子，主要觀察ACEI類藥物依那普利預(yù)處理后MIRI大鼠心肌組

4、織中上述兩種因子在基因及蛋白水平的改變，并推測其可能的心肌作用機制。
　　材料與方法：
　　取清潔級成年SD雄性大鼠35只，體重波動在250-300g。適應(yīng)性喂養(yǎng)5天，隨機分成以下三組:空白組（sham組）7只、缺血再灌注組（IR組）14只、依那普利預(yù)處理組（PIP組）14只。預(yù)處理組給予依那普利10mg/(kg·d)灌胃進(jìn)行預(yù)處理，空白組和缺血再灌注組未做特殊藥物處理，僅給予生理鹽水2ml/d灌胃作為對照，灌胃1周后制備大

5、鼠心肌缺血再灌注損傷(MIRI)模型。sham組只穿線而不結(jié)扎，IR組和PIP組穿線并結(jié)扎30min，結(jié)扎解除后再灌注120min。實驗終末采血測血清中磷酸激酶(CK)活性及丙二醇(MDA)含量，并取3組大鼠左室缺血區(qū)心肌組織，采用RT-PCR方法檢測左室心肌UCP2 mRNA和iNOS mRNA的表達(dá)，Western-Blotting方法檢測左室心肌UCP2及iNOS蛋白含量。SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件用于數(shù)據(jù)分析，組間兩兩比較血清中

6、CK及MDA含量變化、UCP2和iNOS基因及蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1)血清中CK活性及MDA含量
　　與sham組相比，IR組及PIP組血清CK值明顯上高(P＜0.01);PIP組較IR組CK值明顯下降（P＜0.01）;三組中以IR組CK值最高。IR組血清MDA值明顯高于PIP組及sham組(P＜0.01);PIP組高于sham組（P＜0.05）;三組中以IR組血清MDA值最高。
　　2)心肌UCP

7、2表達(dá)
　　與sham組相比較，IR組及PIP組心肌UCP2蛋白含量顯著升高(P＜0.01)，PIP組較IR組顯著降低（P＜0.05）;三組中以IR組UCP2含量最高，心肌組織中UCP2 mRNA水平變化與蛋白變化相平行。
　　3)心肌iNOS表達(dá)
　　與sham組相比，IR組及PIP組心肌iNOS蛋白含量明顯升高（P＜0.01），PIP組較IR組進(jìn)一步升高，具有明顯差異（P＜0.01）;三組中，以PIP組iNOS含量