人體尿液中黃蝶呤與異黃蝶呤的分析方法的研究及其應用.pdf

1、癌癥是威脅人類生命的重大疾病之一,尋找疾病早期診斷方法是提高其治愈率的有效手段之一。蝶呤類化合物(包括黃蝶呤、異黃蝶呤、蝶呤、新蝶呤、生物蝶呤、蝶呤-6-羧酸)屬于蝶啶的衍生物,分布于整個生物界,在細胞代謝過程中起著重要的輔助作用,其含量水平的變化在臨床診斷上具有重要的價值。在蝶呤類化合物中,以新蝶呤研究較為深入,并已應用于臨床上包括癌癥在內(nèi)的多種疾病的診斷,而其它蝶呤類化合物相對研究較少。
　　 本論文應用色譜分析技術,研究建

2、立了人體尿液中黃蝶呤、異黃蝶呤三種分析新方法,并選擇其中一種方法應用于大量健康人及癌癥病人尿樣分析,通過T檢驗發(fā)現(xiàn),和健康人相比,癌癥病人尿液中黃蝶呤和異黃蝶呤水平存在顯著性差異。同時采用三維熒光光譜技術獲得了不同人群尿液的指紋圖譜,結(jié)合主成分分析的投影判別法和聚類分析法對尿樣三維熒光譜的特征參數(shù)進行了模式識別研究。本文主要研究結(jié)果如下:
　　 1.建立了高效液相色譜.熒光分析同時測定人體尿液中的黃蝶呤與異黃蝶呤的分析新方法。以

3、磷酸鹽緩沖溶液(PH=7.5)-甲醇(98:2,v:v)為流動相,流速為1.0 mL/min,熒光檢測波長λex=345 nm,λem=420 nm。黃蝶呤含量在0.0013μg/mL～0.945μg/mL范圍內(nèi)與色譜峰面積呈良好的線性關系,線性回歸方程為y=3.0×106x+28959,相關系數(shù)為0.9999,檢測限為0.5 ng/mL；異黃蝶呤含量在0.00017μg/mL～0.118μg/mL范圍內(nèi)與色譜峰面積呈良好的線性關系,線

4、性回歸方程為y=1.0×108x-162133,相關系數(shù)為0.9996,檢測限為0.05 ng/mL。平均加標回收率分別在83.9％～106.0％之間,相對標準偏差小于7.9％。尿液前處理方法簡單,易操作。該方法用于人體尿液中黃蝶呤與異黃蝶呤的分析,結(jié)果良好。
　　 2.建立了高效液相色譜.電噴霧質(zhì)譜(HPLC-ESI-MS)同時測定人體尿液中黃蝶呤與異黃蝶呤的分析方法。尿樣經(jīng)離心、過膜后直接進樣,采用電噴霧質(zhì)譜定性及定量。結(jié)果

5、表明,黃蝶呤與異黃蝶呤濃度分別在0.0204μg/mL～2.04μg/mL及0.0202μg/mL～2.02μg/mL范圍內(nèi)與色譜峰面積呈良好的線性關系,線性回歸方程分別為y=342622x-7848(r2=0.9995)及y=309694x-3573(r2=0.9997),檢測限分別為0.007μg/mL和0.006μg/mL。黃蝶呤與異黃蝶呤加標平均回收在88.0％～110.0％之間。該方法前處理方法簡單,易操作,應用于實際尿樣分析

6、,結(jié)果良好。
　　 3.建立了高效陰離子交換色譜-積分脈沖安培測定人體尿液中異黃蝶呤的分析方法。尿液經(jīng)ENVI-18與732型陽離子交換柱串聯(lián)萃取后,除去了大量干擾物質(zhì)。采用IonPac AS21分析柱(2 mm×250 mm),以0.020 mol/L NaOH溶液為淋洗液,流速為0.40 mL/min,在優(yōu)化的安培檢測波形條件下,異黃蝶呤在0.005μg/mL～0.200μg/mL濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關系,相關系數(shù)

7、為0.9984,檢出限為0.003μg/mL。健康人及癌癥病人尿液在2.00μg/mL和5.00μg/mL兩個添加水平的平均回收率在95.4％～96.8％之間,相對標準偏差小于5％。此方法環(huán)保、快速、準確,可用于健康人與癌癥病人尿液中異黃蝶呤的測定。
　　 4.運用高效液相色譜-熒光分析法對34個健康人,29個胃癌病人及14個其它癌癥病人的尿樣中黃蝶呤與異黃蝶呤進行測定,通過T檢驗發(fā)現(xiàn),與健康人相比,胃癌及其它癌癥病人尿樣中黃蝶