苦豆子總堿治療大鼠實驗性結(jié)腸炎作用機制的研究.pdf

1、目的：探討苦豆子總堿(TAsA)治療大鼠潰瘍性結(jié)腸炎的作用機制。 方法：1．觀察TASA對潰瘍性結(jié)腸炎(UC)大鼠模型病理改變的影響，大鼠UC模型由三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇灌腸制成，評價UC大鼠在急慢性期(第7、21天)的癥狀和觀察結(jié)腸組織學變化；2．通過流式細胞術(shù)觀察TASA對UC大鼠外周血(PB)和結(jié)腸組織(COLON)中調(diào)節(jié)性T細胞(regulatory T cells，Tr)CD4<'+>CD25<'+>，CD8<

2、'+>CD28<'->分別在急慢性期中表達的影響；3．通過酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和逆轉(zhuǎn)錄酶PCR(RT-PCR)觀察TASA對UC大鼠細胞因子IL-10表達的影響；4．探討COLON炎癥慢性期的疾病活動指數(shù)評分(DAI)與CD8<'+>CD28<'->Tr之間的相關(guān)性，COLON炎癥慢性期的組織學損傷與CD8<'+>CD28Tr之間的相關(guān)性；PB CD4<'+>CD25<'+>Tr和細胞因子IL-10表達的相關(guān)性；COLON CD

3、4<'+>CD25<'+>Tr和細胞因子IL-10表達的相關(guān)性。 結(jié)果：1．在急慢性期中，模型組大鼠DAI和組織學損傷評分顯著高于正常組(P<0.05)，TASA三個劑量組(60、30、15mg/kg)在慢性期中均低于模型組(P<0.05)。2．①建模后第7天：與正常對照組相比，模型組COLON內(nèi)T細胞亞群CD4<'+>CD25<'+>，cD4<'+>cD25<'+>/CD25<'->顯著降低，CD8<'+>CD28<'->及C

4、D8<'+>CD28<'->/CD28<'+>顯著升高(P<0.05)，TASA三個劑量組雖有調(diào)節(jié)作用，但統(tǒng)計學差異不顯著(P>0.05)。②建模后第21天：與正常對照組相比，模型組COLON中的CD4<'+>CD25<'+>、CD4<'+>CD25<'+>/CD25<'->表達顯著降低，CD8<'+>CD28<'->、CD8<'+>CD28<'->/CD28<'+>的表達顯著升高(P<0.01)，TASA三個劑量組能有效的調(diào)節(jié)其表達(

5、P<0.05)；模型組大鼠PB中的CD8<'+>CD28<'->和CD8<'+>CD28<'->/CD28<'+>的表達高于正常對照組，TASA三個劑量組能有效的下調(diào)其高表達(P<0.05)。③除正常組外，模型組、5-ASA組、苦豆子三個劑量組的COLONCD8<'+>CD28<'->表達的增長幅度與PB的相比，分別在第7天和第21天中都有顯著性意義(P<0.05)。3．在ELISA檢測中，模型組COLON和PB中IL-10的表達較對照

6、組均顯著降低(P<0.01)，其中以COLON中的IL-10降低的更加明顯(P<0.01)；且TASA高、中、低三個劑量組都能顯著性上調(diào)COLON和PB中的IL-10的表達(P<0.05)，但COLON的治療變化與PB的相比差異不明顯。4．COLON炎癥慢性期的DAI與CD8<'+>CD28<'->Tr之間存在的正相關(guān)性(Pearson r=0.828，p<0.01)，COLON炎癥慢性期的組織學損傷與CD8<'+>CD28<'->Tr

7、之間存在正相關(guān)性(Pearson r=0.819，P<0.01)；COLON炎癥慢性期的CD4<'+>CD25<'+>Tr與細胞因子IL-10表達成正相關(guān)(Pearson r=0.789，P<0.01)；PB炎癥慢性期的CD4<'+>CD25<'+>Tr與細胞因子IL-10表達無相關(guān)性(Pearson r=-0.191，P>0.05)，每組檢測都為雙側(cè)，樣本容量N=42。 結(jié)論：1．苦豆子總堿能改善UC大鼠結(jié)腸的一般病理變化：各

8、給藥組可見黏膜脫落或壞死減輕，黏膜及黏膜下層炎細胞(淋巴細胞，中性粒細胞，嗜酸性粒細胞)浸潤減少，纖維組織只有少量增生，偶見小潰瘍，癥狀改善明顯；2．TASA通過有效的調(diào)節(jié)CD4<'+>CD25<'+>Tr、CD8<'+>CD28<'->Tr，緩解炎癥反應；3．TASA能升高UC大鼠血清細胞因子IL-10的表達，改善炎癥狀態(tài)；4．COLON炎癥慢性期的DAI與CD8<'+>CD28<'->Tr之間存在的正相關(guān)性，COLON炎癥慢性期的組