流式細胞術檢測NK細胞信號通路磷酸化的方法建立及其初步應用.pdf

1、目的:該實驗采用了NK細胞作為研究的主要細胞.自然殺傷細胞(natural killer cell,NK)是在20世紀70年代初被發(fā)現(xiàn)的.當時人們在腫瘤免疫研究中發(fā)現(xiàn)來自正常機體淋巴細胞可以殺傷某些腫瘤細胞,隨后證實這些淋巴細胞的殺傷作用是天然的,無須有抗體存在或預先致敏,因此將其命名為自然殺傷細胞.與T、B細胞不同,NK細胞不表達典型的T、B細胞的表面標志(TCR、BCR).多種細胞因子受體介導的信號轉導對NK細胞的發(fā)育分化以及功能有

2、重要的調節(jié)作用.其中IL-15對NK細胞的發(fā)育、成熟起最關鍵的作用,IL-15還能刺激NK細胞增殖、明顯提高NK細胞的細胞毒活性、共刺激NK細胞分泌多種細胞因子和趨化因子、調節(jié)NK細胞/巨噬細胞相互作用、協(xié)調外周NK細胞動態(tài)平衡等.我們選用IL-15作為NK細胞的刺激劑來研究其對NK細胞信號通路的影響.結論:1.流式細胞術可以用于檢測胞內信號分子;2.IL-15能夠活化NK細胞系的ERK1/2信號途徑,而且這種活化具有時間和劑量依賴性,

3、但是IL-15對p38 MAPK、JNK、Akt(Thr308)、Stat1通路沒有影響;3.IL-15能夠活化外周血NK細胞的ERK1/2信號途徑,但是對同時檢測的p38 MAPK、JNK、Akt(Thr308)、Stat1通路沒有影響;4.U0126能夠抑制IL-15對NK細胞ERK1/2信號途徑的活化;5.流式分析表明NK-92細胞和K562細胞可以相互結合;6.流式分析表明NK-92細胞和K562細胞相互結合可以活化NK細胞的E