流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)NK細(xì)胞信號(hào)通路磷酸化的方法建立及其初步應(yīng)用.pdf

1、目的:該實(shí)驗(yàn)采用了NK細(xì)胞作為研究的主要細(xì)胞.自然殺傷細(xì)胞(natural killer cell,NK)是在20世紀(jì)70年代初被發(fā)現(xiàn)的.當(dāng)時(shí)人們?cè)谀[瘤免疫研究中發(fā)現(xiàn)來(lái)自正常機(jī)體淋巴細(xì)胞可以殺傷某些腫瘤細(xì)胞,隨后證實(shí)這些淋巴細(xì)胞的殺傷作用是天然的,無(wú)須有抗體存在或預(yù)先致敏,因此將其命名為自然殺傷細(xì)胞.與T、B細(xì)胞不同,NK細(xì)胞不表達(dá)典型的T、B細(xì)胞的表面標(biāo)志(TCR、BCR).多種細(xì)胞因子受體介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)對(duì)NK細(xì)胞的發(fā)育分化以及功能有

2、重要的調(diào)節(jié)作用.其中IL-15對(duì)NK細(xì)胞的發(fā)育、成熟起最關(guān)鍵的作用,IL-15還能刺激NK細(xì)胞增殖、明顯提高NK細(xì)胞的細(xì)胞毒活性、共刺激NK細(xì)胞分泌多種細(xì)胞因子和趨化因子、調(diào)節(jié)NK細(xì)胞/巨噬細(xì)胞相互作用、協(xié)調(diào)外周NK細(xì)胞動(dòng)態(tài)平衡等.我們選用IL-15作為NK細(xì)胞的刺激劑來(lái)研究其對(duì)NK細(xì)胞信號(hào)通路的影響.結(jié)論:1.流式細(xì)胞術(shù)可以用于檢測(cè)胞內(nèi)信號(hào)分子;2.IL-15能夠活化NK細(xì)胞系的ERK1/2信號(hào)途徑,而且這種活化具有時(shí)間和劑量依賴(lài)性,

3、但是IL-15對(duì)p38 MAPK、JNK、Akt(Thr308)、Stat1通路沒(méi)有影響;3.IL-15能夠活化外周血NK細(xì)胞的ERK1/2信號(hào)途徑,但是對(duì)同時(shí)檢測(cè)的p38 MAPK、JNK、Akt(Thr308)、Stat1通路沒(méi)有影響;4.U0126能夠抑制IL-15對(duì)NK細(xì)胞ERK1/2信號(hào)途徑的活化;5.流式分析表明NK-92細(xì)胞和K562細(xì)胞可以相互結(jié)合;6.流式分析表明NK-92細(xì)胞和K562細(xì)胞相互結(jié)合可以活化NK細(xì)胞的E