流式細(xì)胞術(shù)在植物上的應(yīng)用.pdf

1、流式細(xì)胞術(shù)是20世紀(jì)中期迅速發(fā)展起來的一項快速分析和分選的技術(shù)。它將液流技術(shù)、光學(xué)技術(shù)、計算機技術(shù)以及電子技術(shù)集于一體，完成對懸浮粒子的準(zhǔn)確分析和分選。20世紀(jì)80年代這項技術(shù)開始在植物DNA含量、細(xì)胞周期、轉(zhuǎn)基因以及次級代謝產(chǎn)物累積檢測等方面得到廣泛應(yīng)用。本文以不同細(xì)胞基因表達(dá)的差異化研究為出發(fā)點，通過調(diào)整消化酶組份、消化時間、固定液的選取、懸浮液的制備、染料的選擇等，探索并初步建立了玉米根尖原生質(zhì)體的分離、流式分析、分選及核酸提取技

2、術(shù)體系;同時，還以五種不同類型的玉米淀粉為材料，成功進(jìn)行了不同來源淀粉的分析和分選，首次建立了淀粉的流式分選技術(shù)體系。取得的主要研究成果有:
　　1.玉米根尖組織原生質(zhì)體的分離和流式分析
　　首先運用酶解法分離根尖組織原生質(zhì)體，然后再利用流式細(xì)胞儀對原生質(zhì)體進(jìn)行分析和分選，可得出以下結(jié)論:(1)玉米根尖組織在酶解液（含1.00％的纖維素酶及0.30％的離析酶，甘露醇濃度為13％，pH為5.8的CPW溶液）中酶解6h可以得到大

3、量有活性的原生質(zhì)體。(2)利用25％的蔗糖溶液可實現(xiàn)對粗制原生質(zhì)體的純化。(3)根尖組織原生質(zhì)體需要Hoechst33342在溫度為38℃，pH為11.59的條件下才能達(dá)到最佳的染色效果。(4)根尖原生質(zhì)體能夠分成兩個明顯的細(xì)胞亞群。
　　2.玉米根尖固定及其核酸提取
　　通過對固定過的玉米根尖組織原生質(zhì)體核酸的提取實驗，得出以下結(jié)論:(1)經(jīng)過固定的組織在酶解液（含2.80％的纖維素酶及0.60％的離析酶，pH為5.8的C

4、PW溶液）中，35℃處理4-5小時，可得到大量原生質(zhì)體。(2)利用80％高濃度蔗糖可純化酶解后原生質(zhì)體。(3)以Carnoy2、Methacarn溶液固定的玉米根尖原生質(zhì)體進(jìn)行核酸提取，對提取核酸的濃度和質(zhì)量影響較小，是適合以核酸提取為目的的材料固定方法。
　　3.不同類型玉米淀粉的流式分析和分選
　　通過對不同類型玉米淀粉的流式分析，得出以下結(jié)論:(1)不同類型的玉米淀粉均可被熒光染料APTS染色，0.25％的gelzan