銀屑病患者皮損和外周血中漿細胞樣樹突狀細胞，TLR9、IRF-7、IFN-αmRNA表達研究.pdf

1、第一部分漿細胞樣樹突狀細胞在銀屑病患者皮損中募集 目的: 探討漿細胞樣樹突狀細胞（Plasmacytoid Dendritic Cell，pDC）在銀屑病患者皮損和正常皮膚中的聚集及其意義。 方法: 收集本院皮膚科門診或病房經臨床與病理檢查后診斷明確的尋常型進行期銀屑病患者皮損22例，15例整形外科患者的皮膚做正常對照，液氮快速冷凍后－70℃保存?zhèn)溆谩Ｃ坷p做冰凍切片三張，采用免疫組織化學S-P法，檢測pDC特異性抗原

2、CD123，以胞膜或胞質出現棕黃色顆粒物質，且著色強度明顯高于背景非特異性染色為準記數，取光學顯微鏡下每平方毫米視野（10×40）中的陽性細胞數，即在×10目鏡×40物鏡下，隨機選擇5個視野，其中每平方毫米內的平均陽性細胞數作為記數標準，以均數±標準差表示。 結果: 在22例銀屑病皮損中，CD123＋的pDC在真皮乳頭、表皮基底層均有浸潤，呈棕黃色顆粒，具體表達結果是10±2.1，15例正常對照皮膚中CD123沒有出現或零星出現

3、，具體結果是0.4±0.6，在統計學上差異有顯著性（P<0.01）。 結論: CD123陽性的pDC在銀屑病患者皮損中浸潤明顯增加，可能與銀屑病的發(fā)病相關。 第二部分、漿細胞樣樹突狀細胞在銀屑病患者外周血中的比例。 目的：探討CD123+BDCA-2+漿細胞樣樹突狀細胞（plasmacytoid dendritic cell，pDC）在銀屑病患者和正常人外周血中的比例及其意義。 方法：收集本院皮膚科門診或

4、病房經臨床與病理檢查后診斷明確的22例尋常性進行期銀屑病患者；正常人對照15例，均源自本院整形外科。取患者以及正常人對照組肘靜脈血2ml，肝素抗凝（20μl/ml），置于5ml專用試管中。采用流式細胞分析術檢測22例銀屑病患者外周血CD123+BDCA-2+pDC的比例，15例整形外科手術病人的外周血作正常對照。 結果：流式細胞術顯示尋常型銀屑病患者外周血中，CD123+BDCA-2+pDC占外周血單個核細胞的比例是（0.17±

5、0.07）％，正常對照外周血中CD123+BDCA-2+pDC占外周血單個核細胞的比例是（0.33±0.20）％。同正常對照相比，pDC在銀屑病患者外周血中下降，在統計學上差異有顯著性（P<0.01）。 結論：CD123+BDCA-2+pDC在銀屑病皮膚中聚集可能起因于pDC活化從血中進入皮膚重新分布。 第三部分TLR9及其mRNA 在銀屑病患者皮損中的表達 目的：探討TLR9及其mRNA在銀屑病患者皮損和正常皮

6、膚中的表達及其意義。 方法：收集本院皮膚科門診或病房經臨床與病理檢查后診斷明確的尋常型進行期銀屑病患者皮損22例，15例整形外科患者的皮膚做正常對照，液氮快速冷凍后－70℃保存?zhèn)溆谩Ｃ庖呓M織化學：組織甲醛固定后，石蠟包埋，每例皮損做石蠟切片三張，采用免疫組織化學S-P法，檢測TLR9的表達，以胞膜或胞質出現棕黃色顆粒物質，且著色強度明顯高于背景非特異性染色為準記數，取光學顯微鏡下每平方毫米視野（10×40）中的陽性細胞數，即在×

7、10目鏡×40物鏡下，隨機選擇5個視野，其中每平方毫米內的平均陽性細胞數作為記數標準，以均數±標準差表示。RT-PCR：取皮膚標本50mg加1mlTrizol按說明書抽提RNA并逆轉錄。合成的cDNA于－20℃保存或直接行PCR擴增，擴增產物于于1.5％瓊脂糖凝膠穩(wěn)壓電泳，紫外燈下觀察結果并攝影。 結果：在22例銀屑病皮損中，TLR9陽性細胞在真皮上部表達，呈棕黃色顆粒，具體表達結果是14±2.2，15例正常對照皮膚中未檢測到T

8、LR9的陽性表達，在統計學上，差異有顯著性（P<0.01）。銀屑病皮損及正常人皮膚中均有TLR9mRNA的表達。在銀屑病皮損TLR9mRNA的表達水平為1.2818±0.0902，較正常人對照組（0.8681±0.0302）明顯增高，在統計學上差異有顯著性（P<0.01）。 結論：TLR9及其mRNA在銀屑病患者皮損中的表達明顯增加，可能與銀屑病發(fā)病相關。 第四部分、IRF-7mRNA、IFN-αmRNA在銀屑病患者皮損

9、中的表達。 目的：探討銀屑病患者皮損中干擾素調節(jié)因子7（Interferon regulate factor,IRF-7）、干擾素α（Interferon-a,IFN-α）mRNA的表達及其意義。 方法：收集本院皮膚科門診或病房經臨床與病理檢查后診斷明確的尋常型進行期銀屑病患者皮損22例，15例整形外科患者的皮膚做正常對照，液氮快速冷凍后－70℃保存?zhèn)溆谩２捎媚孓D錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）方法檢測22例銀屑病患者皮

10、損和15例正常對照中IRF-7、IFN-αmRNA的表達。 結果：尋常型銀屑病患者皮損中IRF-7mRNA的相對量為0.9817±0.0503，較正常人對照組（0.6343±0.0439）明顯增高，在統計學上差異有顯著性（P<0.001）。尋常型銀屑病患者皮損中IFN-αmRNA的相對量為0.8524±0.0465，正常人皮膚組織中為0.8324±0.0244，在統計學上差異無顯著性（P＞0.05）。 結論：在銀屑病皮損