地衣芽孢桿菌產(chǎn)β-甘露聚糖酶發(fā)酵和純化工藝的響應面法優(yōu)化.pdf

1、為了對中性β-甘露聚糖酶產(chǎn)生菌-地衣芽孢桿菌TJ-101的發(fā)酵工藝和純化工藝進行優(yōu)化，本文貫穿運用了響應面(Response Surface Methodology)優(yōu)化方法中的因素篩選實驗設計法(Plackett-Burman)和中心復合設計法(Central composite design)對自控發(fā)酵罐的發(fā)酵過程、絮凝純化條件、雙水相分離和膜濃縮進行了優(yōu)化實驗設計，并采用噴霧干燥手段得到固體酶制劑產(chǎn)品。 本文采用擴試常用的

2、6.6L自控發(fā)酵罐進行分批發(fā)酵實驗，對影響地衣芽孢桿菌發(fā)酵生產(chǎn)β-甘露聚糖酶過程中的三個重要影響因素：攪拌速度、通氣量及發(fā)酵時間進行中心組合設計，并進行響應面分析，得到最優(yōu)產(chǎn)酶條件：攪拌速度658.58r/min，發(fā)酵時間46.34h，通氣量5.0L/min，在此條件下β-甘露聚糖酶的酶活力達到440U/mL。 以聚鋁為助凝劑，采用陰離子聚丙烯酰胺和陽離子聚丙烯酰胺為絮凝劑，對粗酶液的絮凝分離條件進行了考察，采用Plackett

3、-Burman設計法進行重要因素的篩選，并對其采用中心組合法設計實驗，通過響應面優(yōu)化得到加水量240.55％(V)，陽離子加入量14.13％(V)，陰離子加入量16.97％(V)的最佳絮凝條件，在此條件下酶活收率達到72.93％。酶制劑產(chǎn)品，酶活高達3000U/g。利用噴霧干燥將純化后的酶液制成固體考察了β-甘露聚糖酶在雙水相萃取中的分配行為，并對聚乙二醇(PEG)與硫酸鹽和磷酸鹽的不同組合進行了篩選，得到PEG1000/(NH4)25