枯草芽孢桿菌WD23β-甘露聚糖酶的產(chǎn)生、純化及性質(zhì)研究.pdf

1、β-甘露聚糖酶是一類能夠水解含β-1，4-D-甘露糖苷鍵的內(nèi)切水解酶，屬于半纖維素酶類，在食品、醫(yī)藥、造紙、紡織印染、石油開采及生物技術(shù)等多方面得到了廣泛運用。
　　本文所用的β-甘露聚糖酶產(chǎn)酶菌株是從東北林業(yè)大學(xué)微生物實驗室保藏的菌株中篩選出來，經(jīng)鑒定為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)，命名為枯草芽孢桿菌WD23。對該菌株進行產(chǎn)酶發(fā)酵條件優(yōu)化、β-甘露聚糖酶的純化、酶學(xué)性質(zhì)、酶對瓜膠及改性瓜膠的降解等方面研究，

2、獲得如下結(jié)果:
　　(1)通過單因素及正交試驗優(yōu)化，菌株產(chǎn)β-甘露聚糖酶最優(yōu)發(fā)酵條件為:3％魔芋粉，1％牛肉膏+1％ NH4H2PO4，初始pH值9.0，裝液量100mL/250mL，接種量為1％，搖床轉(zhuǎn)數(shù)180r/min，37℃培養(yǎng)12h可達到產(chǎn)酶高峰期，最高產(chǎn)酶量為2451U/mL，是未優(yōu)化前的5.8倍。
　　(2)通過DEAE-Sepharose FF離子交換層析和Sephadex G-75凝膠過濾等純化技術(shù)對枯草芽孢

3、桿菌WD23胞外β-甘露聚糖酶進行了純化，最終純化倍數(shù)達14.1倍，回收率為20.7％。經(jīng)SDS-PAGE電泳測定純酶的分子量約為40kDa。
　　(3)該酶的最適反應(yīng)pH值為5.6，酶在pH5.0～7.0的范圍內(nèi)穩(wěn)定性較好。酶反應(yīng)最適溫度為55℃，酶在低于55℃條件下保存150min酶活性較好。金屬離子中Ca2+、Mg2+、Ba2+、Co2+、Zn2+、K+對枯草芽孢桿菌WD23β-甘露聚糖酶有不同程度的激活作用，其中Ca2+作

4、用最為明顯;而Na+、NH4+、Li+對酶活有抑制作用，其中Li+的抑制作用最明顯。動力學(xué)常數(shù)結(jié)果顯示:以魔芋膠為底物時，β-甘露聚糖酶的Km和Vm分別為0.11mg/mL和52.9μg/min·mL;以刺槐豆膠為底物時，β-甘露聚糖酶的Km和Vm分別為2.33mg/mL和1666.7μg/min·mL;以瓜膠為底物時，β-甘露聚糖酶的Km和Vm分別為2.8mg/mL和2000μg/min·mL。該酶對魔芋膠的親和性最好。
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