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1、目的:本實(shí)驗(yàn)主要是通過(guò)比較酒炙對(duì)川牛膝飲片主要化學(xué)成分含量的影響,考察炮制前后各指標(biāo)成分的變化;建立炮制前后高效液相指紋圖譜并分析炮制前后指紋圖譜的其差異;同時(shí)對(duì)不同商品規(guī)格川牛膝及川牛膝藥材不同部位中有效成分的含量進(jìn)行比較。為研究川牛膝酒炙原理打下基礎(chǔ),為川牛膝酒炙規(guī)范化研究提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),為正確評(píng)定川牛膝商品規(guī)格,制定川牛膝質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù),為中醫(yī)臨床正確應(yīng)用牛膝炮制品提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。同時(shí),對(duì)于目前中藥飲片GMP生產(chǎn)和認(rèn)證中存在的問(wèn)
2、題進(jìn)行評(píng)價(jià)和分析。
方法:查閱古代文獻(xiàn)和現(xiàn)代文獻(xiàn)并進(jìn)行分析整理,總結(jié)前人炮制經(jīng)驗(yàn),撰寫(xiě)文獻(xiàn)綜述。購(gòu)入飲片和藥材,按文獻(xiàn)方法進(jìn)行炮制。采用HPLC法,篩選提取工藝和色譜條件,測(cè)定川牛膝藥材、不同規(guī)格飲片和酒炙品中阿魏酸、杯莧甾酮的含量,確定酒炙對(duì)川牛膝阿魏酸、杯莧甾酮的影響和不同規(guī)格川牛膝中阿魏酸、杯莧甾酮含量的差異。采用HPLC法,初步研究了川牛膝商品等級(jí)與其有效成分含量的聯(lián)系。采用HPLC法,建立川牛膝飲片和酒川牛膝飲片指紋
3、圖譜,并對(duì)其相似度進(jìn)行評(píng)價(jià)。查閱資料和實(shí)地調(diào)查,對(duì)中藥飲片GMP生產(chǎn)和認(rèn)證過(guò)程中出現(xiàn)的問(wèn)題進(jìn)行總結(jié)和分析進(jìn)行了總結(jié)和分析。
結(jié)果:完成“川牛膝現(xiàn)代研究進(jìn)展”文獻(xiàn)綜述1篇。
確定阿魏酸含量測(cè)定的前處理方法:堿提酸沉后用氯仿萃取精制。阿魏酸的HPLC條件為:流動(dòng)相甲醇:0.4%醋酸水(40:60),檢測(cè)波長(zhǎng)360nm,流速1.0ml/min,柱溫為35℃。阿魏酸在2.368μg~7.104μg內(nèi)線性范圍良好(R2=0.9
4、999)。含量測(cè)定結(jié)果為川牛膝生品中阿魏酸含量約為0.574%~0.796%,平均含量為0.669%。川牛膝酒炙品中阿魏酸含量約為0.589%~0.849%,平均含量為0.713%。
確定杯莧甾酮含量測(cè)定的前處理方法為甲醇回流法。杯莧甾酮含量測(cè)定的色譜條件為:流動(dòng)相甲醇:水(37:63)檢測(cè)波長(zhǎng)243nm,流速1.0ml/min,柱溫35℃。杯莧甾酮在1.180μg~4.130μg范圍內(nèi)線性良好(R2=1)杯莧甾酮含量測(cè)定的結(jié)
5、果為:生品杯莧甾酮含量約為0.037%~0.062%,平均含量為0.048%,酒炙品杯莧甾酮含量為0.041%~0.081%,平均含量為0.054%。
川牛膝蘆頭中所含杯莧甾酮含量為0.024%,須根中杯莧甾酮含量為0.051%,杯莧甾酮含量一等藥材﹤二等藥材﹤?cè)人幉?阿魏酸含量三等藥材﹤二等藥材﹤一等藥材。川牛膝飲片統(tǒng)貨和選貨所含杯莧甾酮和阿魏酸無(wú)明顯差異。
確定川牛膝指紋圖譜的前處理方法為甲醇熱回流提取。建立了
6、川牛膝指紋圖譜的色譜方法,明確指出其含有7個(gè)共有峰,并建立其共有模式,初步建立了川牛膝指紋圖譜及其質(zhì)量評(píng)價(jià)方法。同時(shí)在290nm處發(fā)現(xiàn)生品和制品色譜圖的不同,為研究川牛膝酒炙原理起到了一定的推動(dòng)作用。
撰寫(xiě)出“中藥飲片GMP生產(chǎn)現(xiàn)狀思考”綜述。通過(guò)對(duì)中藥飲片GMP生產(chǎn)和認(rèn)證過(guò)程中出現(xiàn)的問(wèn)題進(jìn)行總結(jié)和分析,就飲片行業(yè)發(fā)展的現(xiàn)狀和前景提出了自己的看法進(jìn)行了思考。
結(jié)論:酒炙對(duì)川牛膝化學(xué)成分產(chǎn)生了影響。酒炙后杯莧甾酮和阿魏
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