白屈菜生物堿類成分提取、分離、純化及體外抑菌作用研究.pdf

1、白屈菜(Chelidonium majus L.)為罌粟科白屈菜屬植物，別名土黃連，山西瓜，“性涼，味苦，有小毒，入肺、心、腎三經(jīng)”，首載于《救荒本草》，全草入藥，具有清熱解毒、鎮(zhèn)痛、止咳、平喘、疔瘡消腫之功效。喜生于山谷的濕潤地帶，林緣水溝邊，廣泛分布于歐亞大陸，北美等地，在我國主要分布于東北，華北等眾多省份，自然資源極其豐富。 白屈菜中主要有效成分是生物堿類物質(zhì)，全草約含生物堿0.97～1.87％，根含生物堿1.9～4.14

2、％。迄今為止已經(jīng)累計報道其中含有苯并菲啶型、原托品型、原小檗堿型、阿樸菲型四大結構類型共計29種生物堿?，F(xiàn)代藥理作用證明白屈菜中重要的活性成分是具有明顯生物活性和生理功能異喹啉類生物堿，主要為白屈菜堿、白屈菜紅堿、血根堿等。 迄今為止，關于白屈菜單體分離的研究較為深入，而白屈菜中生物堿提取工藝和含量測定方法的報道較少，并且在白屈菜的藥理作用的研究中，關于白屈菜對畜禽生產(chǎn)常見的細菌性疾病的研究還未見報道。因此，本文由此出發(fā)，對白屈

3、菜中生物堿開發(fā)為新型獸藥的各個關鍵步驟均進行了一些研究，包括生物堿的提取、富集、純化和藥理作用研究，以期為白屈菜的大工業(yè)生產(chǎn)和進一步開發(fā)利用提供理論依據(jù)。 首先，白屈菜中生物堿提取工藝的研究。本文建立了反相HPLC法檢測白屈菜堿含量的色譜條件，運用正交實驗，分別以浸膏重量和白屈菜堿含量作為評價指標，考察了熱浸和超聲波兩種醇提工藝的提取效果，運用SPSS14.0軟件對結果進行分析，得到優(yōu)化的提取工藝如下：以白屈菜浸膏為目標物質(zhì)時，

4、熱浸提法提取效率優(yōu)于超聲波提取法，且差異達到極其顯著，其提取條件為：65％乙醇、料液比1：20，提取溫度80℃，提取時間2h。以白屈菜堿為目標物質(zhì)時，超聲波提取法效果優(yōu)于熱浸提法，差異極其顯著，其提取條件為95％乙醇、料液比1：10，提取溫度50℃，提取時間0.5h，提取頻率為85Hz。 其次，富集方法的研究。本文考察了六種常見大孔吸附樹脂對白屈菜堿的吸附效果，分別是國產(chǎn)常用的D-101型大孔吸附樹脂，AB-8型大孔吸附樹脂，進

5、口的HP-20型，HP-2MG型，SP-700型，SP-850型六種型號。篩選出適合白屈菜生物堿純化工藝用樹脂-SP-700型大孔樹脂，此系列樹脂優(yōu)點突出，前處理和再生均較容易，新樹脂使用30BV95％乙醇處理即可使用，過完樹脂的浸膏容易干燥，經(jīng)HPLC檢測，雜峰與未過樹脂之前大幅減少，富集效果較好。 第三，分離純化的研究。采用常規(guī)的中藥化學手段對白屈菜藥材進行了系統(tǒng)的化學成分研究。采取硅膠正相柱層析，使用石油醚丙酮和氯仿甲醇洗

6、脫系統(tǒng)，得到兩個單體化合物，經(jīng)MS、1HNMR、13C NMR、IR色譜鑒定其中一個為白屈菜堿。 第四，體外抑菌試驗的研究。選擇臨床常見的致病菌，檢測不同工藝不同部位的六種提取物的MIC值。不同工藝的提取物分別是：90％乙醇洗脫AB-8大孔吸附樹脂浸膏、60％乙醇洗脫AB-8大孔吸附樹脂浸膏、氯仿層提取物、水煎劑提取物、水層提取物、正丁醇層提取物。六種細菌分別是大腸桿菌ATCC25922、金黃色葡萄球菌ATCC25923、金黃色

7、葡萄球菌耐藥株、鏈球菌ATCC55121、沙門氏菌、大腸桿菌耐藥株。結果發(fā)現(xiàn)：90％乙醇洗脫AB-8大孔吸附樹脂浸膏對大腸桿菌ATCC25922、大腸桿菌耐藥株MIC值分別為7.8125 mg/mL和15.625mg/mL。60％乙醇洗脫AB-8大孔吸附樹脂浸膏對大腸桿菌ATCC25922、金黃色葡萄球菌ATCC25923、金黃色葡萄球菌耐藥株、大腸桿菌耐藥株MIC值分別為7.8125 mg/mL，7.8125mg/mL，15.625