地膽草化學(xué)成分分離純化及抑菌作用研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、地膽草為菊科植物地膽草(Elephantopus scaber L.)的干燥全草,現(xiàn)收載于《廣東中藥材標(biāo)準(zhǔn)》2010版第二冊,味苦、性寒、歸脾胃經(jīng),具有清熱、消腫、解毒、利尿等功效作用,臨床上常用地膽草及其復(fù)方治療感冒、咳嗽、水腫、皮膚癰癤等癥,曾經(jīng)也被收錄于《中國藥典》1977年版中。據(jù)有關(guān)文獻報道,地膽草具有抗腫瘤、抗菌抗炎、保肝等作用,但是目前對于地膽草抗菌消炎作用的活性成分的研究報道并不明確。因此,本論文采用藥效學(xué)追蹤的方法,對

2、地膽草的化學(xué)成分進行研究,探索出其抗菌作用的主要活性部位及活性化合物。
  主要研究內(nèi)容如下:
  1.以95%乙醇溶液作溶劑,對地膽草植物全草進行提取,再分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進行萃取,得到相應(yīng)的萃取部位。
  2.選取引起皮膚化膿性感染的主要致病菌金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌及皮膚癬癥的主要致病菌紅色毛癬菌、須癬毛癬菌、犬小孢子菌作為受試菌,采用紙片擴散法和微量稀釋法,對地膽草的乙醇提取

3、液及不同溶劑的萃取部位進行體外抑菌活性篩選。
  3.采用反復(fù)硅膠柱層析法、TLC薄層色譜法、Sephadex LH-20凝膠色譜法、半制備液相色譜及UPLC超高效液相色譜等對地膽草活性部位進行了化學(xué)成分分離純化,同時利用1H-NMR、13C-NMR等波譜分析手段,結(jié)合參考文獻對分離到的化合物進行結(jié)構(gòu)解析。
  4.以篩選活性部位的細(xì)菌及真菌作為受試菌,采用微量稀釋法,對地膽草活性部位分離得到的化合物進行體外抑菌活性考察,測

4、定其最小抑菌濃度MIC值。
  研究結(jié)果:
  1.通過紙片擴散法體外抑菌試驗表明:
  乙酸乙酯部位抑菌作用效果顯著,對金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌及綠膿桿菌抑菌圈大小分別為19.33mm、7.58mm和8.96mm,對大腸桿菌抑制作用不明顯;石油醚部位抑制金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌抑菌圈大小分別10.71mm和8.56mm,正丁醇部位抑制金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌抑菌圈大小分別10.21mm和7.30mm,兩者

5、對大腸桿菌和綠膿桿菌抑制作用均不明顯。
  乙酸乙酯部位對紅色毛癬菌、須癬毛癬菌和犬小孢子菌抑菌圈大小分別為16.47mm、13.43mm和14.16mm;石油醚部位抑制紅色毛癬菌、須癬毛癬菌和犬小孢子菌抑菌圈大小分別為12.67mm、8.81mm和9.10mm,正丁醇及水部位對受試真菌無抑制作用。
  通過微量稀釋法體外抑菌試驗表明:
  石油醚部位對金黃色葡萄球菌的MIC為0.50mg/mL,對綠膿桿菌無抑菌活性;

6、乙酸乙酯部位對金黃色葡萄球菌的MIC為0.50mg/mL,對綠膿桿菌的MIC>0.5mg/mL。兩者對表皮葡萄球菌及大腸桿菌均無明顯的抑制作用,正丁醇及水部位抑菌作用不明顯。
  石油醚部位對紅色毛癬菌、須癬毛癬菌和犬小孢子菌的MIC均為0.125mg/mL;乙酸乙酯部位對紅色毛癬菌的MIC為0.063mg/mL,對須癬毛癬菌和犬小孢子菌的MIC均為0.125mg/mL。正丁醇及水部位抑制真菌作用不明顯。
  2.從地膽草乙

7、酸乙酯活性部位中分離鑒定出12個化合物,其中包括倍半萜內(nèi)酯類4個,三萜類3個,黃酮類1個,有機酚酸類2個,甾醇2個,分別為:地膽草內(nèi)酯scabertopin(1)、異地膽草內(nèi)酯isoscabertopin(2)、去氧地膽草內(nèi)酯deoxyelephantopin(3)、異去氧地膽草內(nèi)酯 isodeoxyelephantopin(4)、木栓酮 fiedelin(5)、表無羈萜醇epifriedelanol(6)、羽扇豆醇lupeol(7)、

8、苜蓿素tricin(8)、3-羥基-4-甲氧基苯甲酸isovanillic acid(9)、E-3-(3-乙氧基-4-羥基)苯甲酸E-3-(3-ethoxy-4-hydroxyphenyl) acrylic acid(10)、Stigmasterol豆甾醇(11)、β-Stigmasterolβ-豆甾醇(12)。
  3.通過微量稀釋法對乙酸乙酯活性部位分離到的化合物中的7個化合物進行體外抑菌活性考察發(fā)現(xiàn):地膽草內(nèi)酯和異地膽草內(nèi)酯

9、對金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌的MIC分別為80μg/mL和160μg/mL,去氧地膽草內(nèi)酯和異去氧地膽草內(nèi)酯對金黃色葡萄球菌和表面葡萄球菌的MIC均為160μg/mL,對大腸桿菌、綠膿桿菌均無效。
  地膽草內(nèi)酯和異地膽草內(nèi)酯對紅色毛癬菌和犬小孢子菌無效,但對須癬毛癬菌的MIC為80μg/mL,去氧地膽草內(nèi)酯和異去氧地膽草內(nèi)酯對紅色毛癬菌、須癬毛癬菌和犬小孢子菌的MIC為80μg/mL。
  研究結(jié)論:
  本文通過

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