功能化聚合物微球的制備及其在轉(zhuǎn)基因檢測中的應(yīng)用.pdf

1、盡管轉(zhuǎn)基因作物具備抗蟲害、抗除草劑、高產(chǎn)等優(yōu)良的特性，但人們一直沒有對它的安全性達(dá)成共識(shí)，許多國家都要求食品具有表明轉(zhuǎn)基因成分與含量的標(biāo)簽。目前，最常見的轉(zhuǎn)基因檢測方法包括聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）和熒光實(shí)時(shí)定量PCR（FQ-PCR）。PCR技術(shù)通過擴(kuò)增標(biāo)記基因、啟動(dòng)子基因和終止子基因可實(shí)現(xiàn)快速有效的轉(zhuǎn)基因成分定性、定量檢測。另一方面，隨著科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步，出現(xiàn)了流式細(xì)胞儀、液相芯片等一系列具有更高通量的轉(zhuǎn)基因檢測新手段。
　　轉(zhuǎn)

2、基因的檢測離不開兩大關(guān)鍵步驟，即核酸提取和核酸檢測。而現(xiàn)今的常規(guī)技術(shù)存在一些難以克服的困難。第一，提取植物基因組的經(jīng)典方法通常需要使用有機(jī)溶劑多次抽提和離心，不僅污染環(huán)境，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，不易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，而且易造成有機(jī)溶劑殘留，從而限制后續(xù)生物檢測。第二，作為檢測載體的功能化微球，制備步驟繁瑣，常需要多步反應(yīng)得到。
　　針對以上的問題，本文首先采用無皂乳液聚合法制備了一種粒徑小，分散性較好，磁性強(qiáng)的包埋式磁性聚合物微球。將其用于馬鈴薯類

3、深加工食品的DNA提取中，對深加工食品這一類核酸豐度較低的樣品的DNA提取方法進(jìn)行了研究，并通過常規(guī)PCR和FQ-PCR考察了該方法獲得的基因組核酸的純度與產(chǎn)率。通過將制備的磁性微球以及提取方法與CTAB法、商品化試劑盒相比較，進(jìn)一步探討了該方法的有效性，探討了各種深加工食品的DNA提取方法的優(yōu)點(diǎn)與缺點(diǎn)，針對性與普適性。隨后，將這種磁性微球表面偶聯(lián)寡核苷酸探針，通過探針捕獲實(shí)現(xiàn)了目標(biāo)片段有效而特異性地檢測。
　　本文通過三聚氰胺與

4、甲醛的共縮聚反應(yīng)，制備了一種單分散、親水性、表面富含氨基的包埋式熒光聚合物微球。將這種熒光微球表面結(jié)合特異性核酸探針，通過編碼熒光微球的探針捕獲可在同一時(shí)間實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因成分的定性、定量測定，為液相芯片的快速、高通量轉(zhuǎn)基因檢測打下了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
　　最后，本文通過改進(jìn)無皂乳液聚合法，制備了一種包埋式磁性熒光雙功能化的聚合物微球，通過將其應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因片段的探針捕獲檢測中，對編碼磁性熒光微球的制備及應(yīng)用進(jìn)行了初步探索。
　　綜上所述