山東地區(qū)病死鴨胚中細(xì)菌的分離鑒定及大腸桿菌分子流行病學(xué)調(diào)查.pdf

1、鴨胚在孵化的過程中會有多種原因致使胚體死亡，胚胎發(fā)育受阻，孵化率降低。其中細(xì)菌感染是非常重要的因素，并且因為其廣泛的傳播性和抗生素的濫用，各種致病菌耐藥性的增強(qiáng)，細(xì)菌感染已經(jīng)給養(yǎng)鴨業(yè)造成了嚴(yán)重的損失。
　　2014年9月份以來，山東規(guī)?；N鴨孵化場的胚胎死亡率和弱雛率明顯升高，死亡鴨胚的類型以臭蛋為主，然而該孵化場的消毒工作做的非常到位，鴨群中并未出現(xiàn)明顯的發(fā)病狀況，所以初步懷疑為種源性細(xì)菌感染所致。為進(jìn)一步探討和研究引起該種蛋孵

2、化場鴨胚致死的原因，本研究通過對死亡鴨胚中細(xì)菌的流行病學(xué)調(diào)查及對其某些分子生物學(xué)方面的研究，為闡釋鴨胚死亡原因和細(xì)菌性疾病的預(yù)防提供理論依據(jù)。
　　本研究共分五部分。
　　1.死亡鴨胚中細(xì)菌的分離鑒定
　　通過的對蛋殼無破損的死亡鴨胚細(xì)菌分離培養(yǎng)、形態(tài)染色、16S rDNA基因檢測等檢測方法對11個批次的220枚死亡鴨胚進(jìn)行細(xì)菌的分離鑒定，其中175枚鴨胚中存在細(xì)菌的感染，共分得細(xì)菌187株，21種不同的菌株，混合感染

3、的有13枚，細(xì)菌的感染率為79.5％。187株細(xì)菌中，大腸桿菌98株（52.4%），沙門氏菌15株（8.6%），奇異變形桿菌21株（11.2%），其他克雷伯肺炎菌、綠膿桿菌、沙雷氏菌等18個菌種有53株（27.8%）。結(jié)果表明，造成該種鴨場孵化率和弱雛率上升的主要原因是細(xì)菌感染所致，并且主要致病菌為大腸桿菌、沙門氏菌、奇異變形桿菌。
　　2.主要的致病菌的耐藥性調(diào)查
　　采用Kirby-Bauer法對分離鑒定的98株鴨源大腸

4、桿菌，16株鴨源沙門氏菌，21株鴨源奇異變形桿菌進(jìn)行18種抗生素(頭孢噻吩、四環(huán)素、卡那霉素、諾氟沙星等)的耐藥性檢測，結(jié)果顯示，三種主要致病菌對18種抗生素的表現(xiàn)出不同程度的耐藥，其中大腸桿菌敏感性較高的幾種抗生素為慶大霉素（82.7%），卡那霉素（54.1%），鏈霉素（71.4%），呋喃妥因（84.7%），新霉素（59.2%），多粘菌素B（95.9%）。沙門氏菌敏感性較高的抗生素為氨芐西林（75.0%），頭孢噻吩（75.0%），慶大

5、霉素（93.7%），卡那霉素（81.2%），鏈霉素（100%），四環(huán)素（93.7%），環(huán)丙沙星（93.7%），諾氟沙星（93.7%），氯霉素（87.5%），頭孢氨芐（75.0%），新霉素（100%），多粘菌素B（100%）。奇異變形桿菌敏感性較高的抗生素為頭孢噻吩（57.1%），慶大霉素（80.9%），鏈霉素（71.4%）。該項研究調(diào)查表明，在治療和預(yù)防山東地區(qū)種鴨孵化場致病性細(xì)菌感染時可以選擇性地使用鏈霉素和慶大霉素，同時也為針對性地

6、預(yù)防和控制某種細(xì)菌病原感染提供理論依據(jù)。
　　3.鴨源大腸桿菌的Eric-PCR分型鑒定
　　采用非加權(quán)對數(shù)算術(shù)平均法，在相似性系數(shù)為0.7時，98株大腸桿菌明顯分為A、B、C、D、E、F、G、H8個類群，主要類群為B型，含有32株菌。相似性系數(shù)為100%共有14組，其中組成員數(shù)最多為11株菌，最少為2株。B類群大腸桿菌在7批死胚中都出現(xiàn)過，說明B類群大腸桿菌可能在整個山東省廣泛傳播。不同基因型的大腸桿菌在不同的分菌批次有比

7、較大的差異性和隨機(jī)性，說明不同地區(qū)大腸桿菌的流行狀況有很大的差異，存在著地域性差別。
　　4.鴨源大腸桿菌LPS外核心多糖分型鑒定
　　運(yùn)用LPS外核心多糖的PCR分型方法對分離出來的大腸桿菌進(jìn)行基因分型，結(jié)果為R1（71.4%），R2（6.1%），R3（8.2%），R4（12.2%），K12（2.1%）。該結(jié)果顯示，山東地區(qū)種鴨中比較流行的大腸桿菌LPS外核心多糖類型為R1，該核糖型的流行病學(xué)調(diào)查為其種鴨場對大腸桿菌病的預(yù)